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增强癌症标志蛋白电化学的免疫传感器纳米材料设计 Bioelectrochemistry 76 (2009) 189–194 1.背景 2.研究内容 3.结论 4.展望 背景 早期检测加上新的靶向给药治疗是最好而且及时减少癌症死亡的方法，并且提高治疗效果。生物标志物（本文中的蛋白质），在癌症的发病过程中浓度增加，并且在早期癌症的检测中，可以从血清和组织中测量出来。准确并灵敏的测量蛋白质在癌症检测和监控中有广泛的应用和重要性 对于早期癌症检测，测量癌症标志蛋白的集合，是最有前途而且最可靠的方法。为了提高癌症检测或预测的可靠性，有必要检测血清或组织裂解物中与癌症相关的一系列生物标志蛋白。而现代的LC-MS蛋白组织学方法可以实现这一目标，但目前该技术对于常规诊断点来说过于昂贵，技术上过于复杂。 怎样在常规医疗点实行？ 采用光学或电化学检测蛋白质阵列格式，在设备相对简单的医疗点利用较低的成本可以实现这一目标。生物电子和蛋白微阵列，采用夹心试验检测捕获抗体和酶标记的二次抗体有高选择性和灵敏度，易用性，成本合理性的特点。 基于吸光度的经典酶联免疫吸附试验（ELISA）是一个重要的生物分析方法，对标志蛋白的最低检测限（DL）为3pg/ml 。然而，酶联免疫吸附试验在分析时受到分析时间和标志物灵敏度的限制，相对于大的样品，生物标志物的正常范围低于pg/ml，并且难以测量蛋白质集合。 怎样提高检测的灵敏度和实现低的检测限？ 纳米粒子和有生物分子的高表面积的纳米电极，这些生物分子能从复杂样品例如血清和组织中捕获生物标记蛋白，这就为开发高灵敏度传感器提供了前所未有的新机遇 。 研究内容 1.基于碳纳米管森林的免疫传感器 2.基于金纳米电极和多标记磁性粒子的免疫传感器 1.基于碳纳米管森林的免疫传感器 碳纳米管（CNTs）是一种具有金属或半导电性能的新的分子纳米线 。导电的单壁碳纳米管的表面面积估计可以达到1600m2 g-1，这就为粘附高密度的抗体来实现高灵敏度提供了一个平台。此外，沿着碳纳米管长度方向传导的电子电流密度接近109Acm-2，这可以提高传感器的性能。它还有精湛的机械稳定性。 生物电子免疫传感器检测原里。左下角是连有Ab1的单壁碳纳米管免疫传感器，并从样品中捕获了抗原，左上角是用于装配的生物材料。右图是连有HRP-CNT-Ab2的传感器。 性能的检测 1.安培生物催化可用于评估单壁碳纳米管森林的电化学质量,用安培法测量HRP/SWNT森林电极对纳米范围内过氧化氢催化的结果，灵敏度为1.12μA cm?2 μM?1 。 2.对未稀释的小牛血清中的PSA进行了检测。我们可以看出PSA的最低检测限达到了4pg ml-1 2.基于金纳米电极和多标记磁性粒子的免疫传感器 金纳米粒子电极首先在石墨电极上聚集一层聚乙烯聚阳离子（二甲基二烯丙基氯化铵）（PDDA），然后再吸附一层金纳米粒子（AuNPs）。 在制备电极时，在谷胱甘肽溶液中还原一种金盐，制得谷胱甘肽修饰的金纳米粒子（GSH-AuNP）电极 。随着粒子的生长，由于金纳米粒子表面的谷胱甘肽使得粒子的尺寸保持的很小 。金纳米粒子通过透射电子显微镜进行了表征，发现直径在5纳米。 性能的检测 1.与碳纳米管森林平台一样，我们评估了金纳米粒子电极的生物电子感应性能，催化循环伏安法的结果与单壁碳纳米管森林电极相似。HRP-AuNP电极对过氧化氢有0.28μA μM?1的灵敏度 . 2.我们用金纳米粒子电极建立传感器来用安培法检测未稀释的小牛血清中的PSA。我们发现DL，灵敏度和线性的最佳组合是磁性粒子-Ab2–HRP，而不是传统的Ab2–HRP。 从图 b标准曲线的斜率可以看出灵敏度为3.15nA ml pg-1,是传统的Ab2-HRP测PSA的1700倍。检测限是0.5pg ml-1 . 结论 在质量性能测试中，吸附有辣根过氧化物酶的金纳米粒子电极与单壁碳纳米管森林平台相比，在生物催化过氧化氢的测试中有更好的检测限和灵敏度。血清中癌症标志物PSA的夹心免疫微阵列的评价结果表明，这两种方法对癌症患者的血清标本都有准确结果。通过金纳米粒子免疫传感器与二次抗体和7500 HRP标签修饰的直径1μm的磁性粒子相结合得到最佳检测限（0.5 pg mL-1）和灵敏度。 展望 具有多酶标记的二次抗体吸附着的功能团修饰的高导电性，高表面积结合的电极，对血清中癌症标志蛋白的检测有高的灵敏度和超低的检测限。到目前为止，我们所有的证据表明金纳米粒子修饰的电极比我们以前在生物电化学免疫传感器中用的单壁碳纳米管森林要好或者相当。以上总结的结果表明，金纳米粒子对自动生成纳米结构阵列电极提供了极好的选择。与纳米管森林相似，谷胱甘肽修饰的，并且紧密排列的单层金纳米粒子，附着在捕获的抗体上，并与向外的羧基基