矮化杉木蛋白质组的差异凝胶电泳分析.pdfVIP

维普资讯 浙 江 林 学 院 学 报 2006，23(3)：265～269 JournalofZhejiangForestryCollege 文章编号 ：1000．5692(2006)03—0265-05 矮化杉木蛋白质组的差异凝胶电泳分析 黄华宏 ，童再康 ，朱玉球 ，高燕会 ，许长寿 ，何福基 (1．浙江林学院 林业与生物技术学院，浙江 临安 311300；2．浙江省临安市马啸乡林业站，浙江 临安 311323) 摘要：建立具有高分辨率和稳定性的矮化杉木 Cunninghamialanceolata叶片蛋 白质的双向电 泳图谱 。研究杉木矮化突变的机理。取 同一生长环境下的野生型杉木及矮化突变型杉木新梢 顶端的叶片 ，液氮研磨成粉末后用改良TCA．丙酮沉淀法提取总蛋白，分别用 CY2和 CY3标 记，用DIGE技术进行分析。与野生型杉木相比，在矮化突变型杉木的叶片组织中，有l4个 蛋 白质表达水平显著增加，另外 15个蛋白质表达水平显著下降。所得的29个差异蛋白质可 能与杉木矮化突变的发生有关。图3表3参9 关键词：林木遗传育种学；杉木；矮化突变；蛋白质组；差异凝胶 电泳 中图分类号 ：$722．3 文献标识码 ：A 杉木 Cunninghamialanceolata为我国特产，分布于长江流域以南各省区，是重要的速生用材针叶 树种之一。杉木矮化突变体是逮生木本植物中难得的珍贵种质，为研究杉木生长的分子遗传学机制提 供了理想材料。研究揭示其矮化突变的分子机制，对培育生长速度快、品质性状优 良的杉木优株或无 性系，以及促进林业生产的可持续发展都具有十分重要的意义。迄今为止，有关木本植物矮化突变机 制的报道主要集中在苹果 Malussp．和柑橘 Citrussp．等果树上 】【。]。以往多数研究认为，果树的树体 大小受到植物生长调节剂的明显控制 j。矮化杉木发现于20世纪 70年代 ，但至今 尚无有关矮化杉木 的研究报道。课题组经过20a的繁殖与不同地区栽培试验，发现杉木矮化性状遗传稳定(树高遗传重 复力达0．97)。一般条件下，10～20年生平均树高为 1．86m，平均胸径仅 4．2CITI，树冠呈半球形，侧 枝间距 1—3cm，针叶质地嫩软，雌、雄球花生长异常，花极少且孢子叶球仅为正常杉木的25％左 右。利用双向电泳技术找出差异蛋白并进一步克隆基因，已成为揭示突变机制的一种有效手段。如何 瑞锋等 应用双向电泳分析了水稻 Oryzasativa温敏叶绿素突变体的叶片蛋 白，以探讨其突变原因。 李慧玉等 则采用双向电泳研究了樟子松 Pinussylvestnsvar．mangolica突变丛生枝的发生机理。课题 组利用凝胶内差异显示电泳 (differentialgelelectrophoresis，简称DIGE)技术，以同一生长环境下的矮化 突变型和野生型杉木新梢顶端的叶片作为研究材料，进行蛋白质组差异凝胶 电泳分析，直接从差异表 达 的蛋白质水平来探讨杉木矮化突变的发生机理，为速生相关基 因的分离和分子育种提供理论基础和 科学依据。 收稿 日期：2005．0919；修回日期：200601—19 基金项 目：浙江省科学技术攻关项 目(2004C12022) 作者简介：黄华宏，讲师，硕士，从事植物遗传育种研究。E—mail：huanghh@zjfc．edu．cn 维普资讯 266 浙 江 林 学 院 学 报 2006年 6月 1 材料与方法 1．1 植物材料 矮化突变型杉木和野生型杉木皆为 5年生嫁接植株，生长在同一环境下，在杉木生长季采新梢顶 端的叶片，放入冰瓶带回实验室。用剪刀稍作修剪，迅速用去离子水冲洗 3次 ，滤纸轻轻吸干残余液 滴，放入冻存管，迅速置于液氮 中保存。 1．2 主要试剂 丙烯酰胺 ，甲叉双丙烯酰胺 ，尿素，硫脲 ，甘氨酸，TRIS，CHAPS，SDS，碘乙酰氨，固相 pH干 胶条 (IPGstrippH3～10，NL，24cm)，AmpholytepH3～10，2-Dcleanup试剂盒 ，蛋白质定量试剂盒 ， 均为Amersham公司产品