第6章 灭菌及空气净化.ppt

第六章 灭菌及空气净化;本章知识介绍;为什么要对培养基灭菌？5 1.使生物反应的基质或产物，因杂菌的消耗而损失，造成生产能力的下降。 2.杂菌也会产生代谢产物，这就使产物的提取更加困难，造成得率降低，产品质量下降。 3.有些杂菌会分解产物，使生产失败。 4.杂菌大量繁殖后，会改变反应液的pH值，使反应异常。 5.如果发生噬菌体污染，生产菌细胞将被裂解，使生产失败。 ;培养基灭菌;灭菌：在一定范围内，用物理或化学的方法杀灭物料及设备中的一切微生物，包括微生物的营养体和休眠体，使物料成为无菌状态，是一种彻底灭菌的方法。 消毒：用物理或化学的方法杀灭或清除基质中、物体表面及环境中的部分微生物，是一种不彻底的灭菌方法，只杀死病源菌，未伤及芽孢。;一、常用灭菌方法及原理;2、辐射灭菌 紫外线、x-射线、γ-射线 高能量的???磁辐射和微粒辐射杀死，紫外线240-300nm（265nm），与菌体核酸起反应而造成菌体死亡。 只适合表面灭菌，无穿透力，无菌室、房间、超净工作台;3、干热灭菌 在干燥高温条件下，微生物细胞内各种与温度有关的氧化反应迅速增加，或使蛋白质变性、酶失活，各种细胞成分发生氧化，使微生物中毒死亡。 常用条件：160℃ 120min 适用对象：适用于要求灭菌后物料保持干燥状态物品。;常见微生物的温度系数Q10;;4、滤过介质除菌法;用于滤过除菌的各式滤器;5、湿热灭菌 直接利用饱和蒸气进行灭菌，蒸气具有很强的穿透力，而且在冷凝释放出大量潜热，在高温和水，使微生物体内蛋白质发生变性。;⑴湿热灭菌原理 致死温度：当环境温度超过维持生命活动的最高限温度时，微生物就会死亡。杀死微生物的极限温度。 致死时间：在致死温度下，杀死全部微生物所需要的最短时间。 ;⑵理论灭菌时间的确定 各种灭菌方法都有使培养基营养成分遭到破坏的危险，但其程度受加热温度和时间影响。;对数残留定律的概念： ; 若开始灭菌（? = 0）时，培养基中活的微生物数为N0 ;可见灭菌时间取决于污染程度(N0)、灭菌程度（残留菌数N）和?值;⑷实际灭菌时间的确定 ;例： 有一发酵罐内装40m3培养基，在121℃温度下进行实罐灭菌。原污染程度为每ml有2×105个耐热细菌芽孢， 121℃时灭菌速度常数为1.8min－1。求灭菌失败几率为0.001时所需的灭菌时间。lg8=0.897;(3)死亡速率常数? （比死亡速率）;;⑸影响湿热灭菌的因素 ①灭菌效果和营养成分的保持。 温度越高，灭菌越彻底，营养成分破坏越严重。 ②pH的影响 6～8 最不易死亡；＜6H＋极易渗入细胞改变细胞生理反应。 ③培养基成分 油脂、糖类、蛋白质增加耐热性，薄膜，影响热导入 ④起泡（泡沫） 泡沫形成隔热层，热量难以渗透、分开、混合 ⑤颗粒 颗粒影响，过滤颗粒、延长时间;⑹高温对培养基成分的有害影响及其防止 ;⑺消除高温有害影响的措施5;二、生产上培养基灭菌方法;小型发酵罐灭菌示意图;2、 预热;3、开启蒸汽管，向培养基中通入蒸汽，升温。;5、保温 调节好各进汽和排汽阀门，使罐压和温度保持在一稳定水平，维持一定时间。;6、保温结束后，依次关闭各排汽、进汽阀；待罐内压力降至0.5kg/cm2左右时，向罐内通入无菌空气，向夹套或蛇管中通入冷水，使培养基降至所需温度。;;三）　分批灭菌的优缺点;小型发酵罐灭菌示意图;分批灭菌的注意事项： 1、各路蒸汽进口要畅通，防止短路逆流；罐内液体翻动要剧烈，物料达到均匀。 2、排气量不宜过大，节约蒸汽用量。 3、灭菌要结束时，应立即引入无菌空气维持罐压，并进行冷却。 4、引入无菌空气前，罐内压力必须低于过滤器压力。;2、连续灭菌 将配制好的培养基和物料在向发酵罐等培养装置输送的同时对培养基进行加热、保温、冷却而实现灭菌的方法。 连消塔式连续灭菌流程 喷射加热式连续灭菌流程 板式换热式连续灭菌流程;连消塔式连续灭菌流程; 配料罐（兼作预热）;1)预热;旋涡泵;2)加热;套管式连消塔; 汽液混合式连消器;1 喷嘴 2 吸入口 3 吸入室 4混合喷嘴 5 混合段 6扩大管;4、冷却;喷淋冷却器;板式换热器;板式换热器;板式换热器;板式换热器原理图;当料液经过渐缩喷嘴以高速喷出时，将蒸汽吸入与料液混合，迅速达到灭菌温度。;;二） 连续灭菌的优缺点及注意事项;连消注意事项： 1）连消前，应先进行空罐、维持罐（管）、冷却系统的灭菌； 2）确保管路无渗漏； 3）当培养基含有较大固体颗粒或有较多泡沫时，采用连消容易发生灭菌不彻底。;;三、固体培养基灭菌 蒸