示差分光光度法测定水样中非那西汀的含量.ppt

示差分光光度法测定水样中非那西汀的含量 实验目的 1、通过标准曲线的绘制及样品溶液的测定， 了解示差分光光度法的原理及操作步骤 2、掌握UV-2450型紫外-可见分光光度计的使用方法 实验原理 一、UV-2450型紫外－可见分光光度计基本组成及其工作原理 二、示差分光光度法的原理 一、UV-2450型紫外－可见分光光度计基本组成及其工作原理 1.分光光度法 利用紫外-可见吸收光谱对物质进行定性和定量分析的方法就是紫外-可见分光光度法，属于分子吸收光谱，由分子的外层电子跃迁产生，是宽带吸收光谱。 物质对光吸收遵循朗伯-比尔定律，即当入射光波长一定时，待测溶液的吸光度A与其浓度和液层厚度成正比。 2.分光度计的基本组成 2）单色器 3.UV-2450型紫外－可见分光光度计 日本岛津 单单色器、双光束方式、光电倍增管检测器 特点 1.低杂散光，高光通量，可对高浓度的样品不进行稀释直接测定 2.应用广泛：可用于分析有机、无机化合物；DNA、酶等生化样品；光学材料的特性 3.配备了功能强大的UVProbe软件，包含光谱测定、光度测定、动力学测定和报告处理四大模块，从基本的测定到研究解析都可通过它实现。 操作规程 1.打开电源开关，打开电脑及软件，进入自检界面，进入自检画面。 2.单击确定开始自检，自检过程中不得打开样品室盖 3.完成自检后，单击波长扫描按钮，选择“方式”，设定波长及测量方式（Abs） 4.将参比溶液放入参比池中，另一参比液放入样品池第一池内。点击自动清零键清零。 5.取出样品池中参比，放入测量液，进行全波长扫描，找出最大吸收波长。 6.取出测量液，将标准曲线的五个试样放入测量池中，打开定量分析界面，设定波长和测量方式Abs，测定各点吸收值，绘图 7.放入待测样品，测定 二、示差分光光度法原理及测量方法 例：若普通的分光光度法测得试样的T=5.0%, 配制一浓度稍低的标准溶液S,测得T=10.0%, 二者之差为5%;用差示法时，以此标准溶液S来调节仪器令T=100%,再来测定试样X,可得T=50.0%, 二者之差为50%。这样，差示法相当于把标尺扩大了10倍，测量读数的相对误差也就缩小了10倍。 差示测定试液浓度(Cx)时，采用浓度稍低于试样的标准溶液(Cs)作参比溶液调节仪器透光度读数为100％(A=0)，再测定试样溶液的吸光度(Ar称为相对吸光度)，相对应的透光度(Tr)称为相对透光度。 ２、示差分光光度法的测定步骤： 　1）采用浓度为Cs的标准溶液为参比溶液; 　2）测定一系列ΔC已知的标准溶液的相对吸光度(Ar)； 　3）绘制Ar-ΔC工作曲线； 　4）由测得试样溶液的相对吸光度Ar,x，即可从Ar－ΔC工作曲线上求出ΔC； 　5)根据下式求出试样浓度Cx ： 　　　　　　Cx＝Cs+ΔC 试剂与器材 UV-2450紫外-可见分光光度计， 石英比色皿（1cm）， 容量瓶（50ml）， 移液管（1ml、10ml）， 未知样品液。 实验方法及步骤 1.标准溶液的配制 非那西汀标准溶液（100μg/ml）：准确称取非那西汀0.0500g于小烧杯中，加少许乙醇溶解，转移到500ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用 2.吸收曲线绘制 移取5.00ml非那西汀标准溶液于50ml容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度，摇匀。以蒸馏水为空白，进行全波长扫描，绘制吸收曲线，找出最大波长。 3.绘制工作曲线 取非那西汀标准溶液5ml，10ml，15ml，20ml，30ml分别于5个50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于最大波长处测定吸光度值，以A对c作图绘制工作曲线。 4.样品测定 取10ml样品（浓度在40-60μg/ml）于50ml容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度，摇匀，于最大波长处测定吸光度值。 实验结果 1.绘制非那西汀的吸收曲线 2.绘制工作曲线 3.可由显示器直接读出测定结果，记录 实验注意事项 1.仪器使用时要符合仪器工作环境的要求: 稳固的工作台 ，适宜的温度、湿度， 避免：日光直射、震动、强电场、强磁场。 2.仪器保养和维护方法 ： 用软布稍微蘸取水，轻柔擦拭外表面，避免蘸取过多水而流入仪器内部。 清除样品室内残留液体样品，防止蒸发，避免腐蚀样品室。 3.每半年进行一次波长准确度检查。 4.比色池的使用规则 1）手拿部位：毛玻璃面 2）用镜头纸擦拭透光面 3）用后及时清洗，放入比色池盒内。 附：uv-2450使用说明 1、打开电源开关，打开电脑及软件，进入自检界面，进入自检画面。 2、单击确定开始自检，自检过程中不得打开样品室盖 3、完成自检后，单击波长扫描按钮，选择“方式”，设定波长及测量方式（Abs） 4