1株产纳豆激酶芽孢杆菌固态发酵工艺的优化.pdf

江苏农业科学 2013年第41卷第 12期 高大响，黄小忠，张雪松．1株产纳豆激酶芽孢杆菌固态发酵工艺的优化[J]．江苏农业科学，2013，41(12)：377—379 株产纳豆激酶芽孢杆菌固态发酵工艺的优化 高大响，黄小忠，张雪松 (江苏农林职业技术学院，江苏句容 212400) 摘要：采用单因素试验和正交试验，以豆粕、豆饼粉为原料对纳豆芽孢杆菌固体发酵生产纳豆激酶的工艺条件进 行优化。结果表明，豆粕比豆饼粉更适宜作为发酵原料；以豆粕为原料进行 固体发酵的最佳条件为：豆粕 ：麸皮 = 3：1(质量比)，初始pH值8．0，初始含水量65％，接种量 10％，培养温度33℃，发酵4d达到发酵终点，该工艺下产酶 量可达到 3691IU／g。 关键词 ：纳豆芽孢杆菌；纳豆激酶；固体发酵；优化工艺 中图分类号 ：TQ920．1 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2013)12—0377—03 纳豆激酶(natto—kinase，NK)是从 日本传统食品纳豆中提 1．2 试剂 取出来的一种具有溶血栓功能的丝氨酸蛋白酶 “ 。 目前治 豆粕、豆饼由张家港东海粮油有限公司提供；大豆为市 疗血栓病的常用药品有链激酶(SK)、尿激酶 (UK)、重组组织 售；尿激酶标准品(690IU／支)、纤维蛋白原(74mS／支)、凝 纤溶酶原激活剂(t—PA)、尿激酶原(pro—UK)等，但这些药 血酶(210BPU／支)由中国药品生物制品检定所提供 ；其他药 品具有毒副作用大、在体内半衰期短或价格昂贵等缺点 。 品均为国产分析纯。 纳豆激酶作为一种新型溶栓药物，与当前使用的同类产品相 1．3 培养基 比，具有安全 、无毒、分子量小易吸收等优点。我国已有学者 斜面培养基：蛋白胨5g，牛肉膏5g，NaC15g，琼脂20g， 开展了纳豆芽孢杆菌液体发酵条件研究 。液态发酵通常 pH值 7．2～7．4 选用葡萄糖、酵母膏、胰蛋白胨、黄豆汁等作为原料，成本高， 种子培养基：葡萄糖 10g，蛋 白胨 10g，NaC15g，pH值 难以规模化生产。固体发酵具有成本低、设备简单、原料广 7．2—7．4。 泛、产酶活力高、易推广的优点 。油脂企业生产油脂产生 1．4 茵体培养与酶液收集 大量豆粕和豆饼，蛋白质含量高，一般在40％左右，以其作为 1．4．1 种子液制备 将菌种转接至斜面培养基 ，37℃培养 氮源，再添加其他农副原料，生产纳豆激酶 ，既‘实现了农副产 14h。取 1环活化菌种，接人种子培养基，37℃、200r／min摇 品的有效利用，又降低了生产成本，提高了产品的附加值。本 瓶培养 1d。 研究以筛选的1株产纳豆激酶活力高的芽孢杆菌为研究对 1．4．2 活菌及芽孢率检测 采用倾注法进行活菌计数 ； 象，采用豆粕、豆饼、麸皮、米糠等原料，进行固体发酵 ，对其发 芽孢率测定：将一定稀释度的菌液置于 80℃水浴加热 酵产酶条件进行研究，以期为其规模化生产提供依据。 10min，杀死营养体细胞，采用倾注法计数 叫；芽孢率 ：芽孢 数 占总菌数的比例。 1 材料与方法 1．4．3 粗酶液制备 按体积比15：1向固体发酵培养物中 1．1 菌种 加入0．9％生理盐水，4℃浸提24h，5000r／rain离心 10rain， 纳豆芽孢杆菌(BacillussubtilisnaUo)，由江苏农林职业 得纳豆激酶粗品。 技术学院筛选并保存。 1．5 固体发酵