QuEChERS―超高效液相色谱―串联质谱法测定食用菌中7种荧光增白剂.docVIP

QuEChERS―超高效液相色谱―串联质谱法测定食用菌中7种荧光增白剂 　　摘 要 建立了QuEChERS超高效液相色?V串联质谱法（UPLCMS/MS）测定食用菌中7种荧光增白剂残留量的检测方法。样品前处理采用QuEChERS方法， 食用菌样品用水浸润后， 以甲酸和乙腈提取目标物， C18填料、正丙基乙二胺（PSA）和MgSO4净化， C18色谱柱分离， 乙腈和0.1%甲酸梯度洗脱， 多反应监测（MRM）正离子模式扫描。在优化条件下， 7种荧光增白剂在一定质量浓度范围内线性关系良好， 相关系数均大于0.991， 方法检出限（S/N=3）在0.05～0.40 μg/kg之间， 定量低限（S/N≥10）在0.2～1.3 μg/kg之间， 方法的平均回收率在70.1%～109.2%之间。本方法具有操作简单快捷、灵敏度高等优点。 　　关键词 超高效液相色谱串联质谱法； 荧光增白剂； 食用菌 　　1 引 言 　　荧光增白剂（Fluorescent whitening agents， FWAs）是一种荧光染料， 又称为白色染料， 是一种能吸收不可见的紫外光（波长300～400 nm）， 再激发出可见的蓝色或蓝紫色荧光（波长420～480 nm）的复杂有机化合物[1]。食用菌中荧光增白剂的来源主要有两方面： 人为添加和包装材料污染。食用菌中常检测到的荧光增白剂包括化学结构属香豆素类型荧光增白剂（如C.I. 140）、化学结构属吡唑啉类型荧光增白剂（如C.I. 135、C.I. 185、 C.I. 367、C.I. 393、 C.I. 184）和化学结构属三嗪氨基二苯乙烯型荧光增白剂（如C.I. 353）， 这些荧光增白剂在人体内不易被分解， 其毒性累积在肝脏或其它重要器官， 成为潜在的致癌因素[2]。国家卫生标准GB/T 307982014食品用洗涤剂试验方法――荧光增白剂的测定中明确规定： 食品包装用原纸、餐具洗涤剂、食品工具设备用洗涤剂与洗涤消毒剂中均不得检出荧光性物质， 但至今未见关于食用菌中荧光增白剂的测定的国家和行业标准， 仅有2009年四川省地方标准DB 51/T9072009食用菌中荧光增白剂检验规程的相关报道， 但是该标准采用紫外分光光度法进行检测， 仅能对食用菌中荧光增白剂进行定性分析， 无法对荧光增白剂的种类和含量进行测定， 且人为误差大。 　　目前， 荧光增白剂的检测方法主要有光谱法和色谱法。 光谱法包括白度法、荧光分光光度法和紫外分光光度法； 色谱法则包括高效液相色谱法（HPLC）[3]和高效液相色谱法质谱联用法（HPLCMS/MS）[4～9]等。光谱法只能对荧光增白剂进行半定量检测， 且受人为因素和设备的影响较大； 对于组成复杂的样品， 测定结果的准确性难以保证， 不适用于监督执法部门的相关执法检测。液相色谱法只能依靠化合物的保留时间定性， 易受杂质干扰。液相色谱质谱联用法采用保留时间与特征离子对比例对已知目标物进行定性和定量分析， 准确性和灵敏度优势明显。目前， 对食品接触材料中的荧光增白剂研究较多[10]， 尚未见关于食用菌中荧光增白剂检测的报道。黄薇等[11]采用高效液相色谱法测定食用菌中10种荧光增白剂， 张建莹等[12]采用超高效液相色谱法质谱联用法（UPLCMS/MS）测定食用菌中3种荧光增白剂， 这些研究均采用固相萃取对样品进行前处理。QuEChERS（Quick， Easy， Cheap， Effective， Rugged and Safe）是基于分散固相萃取发展起来的一种集萃取和净化为一体的新型前处理方法， 能够有效缩短前处理时间， 提高检测效率， 已在农药残留检测、临床医学、兽药及医药残留等领域中广泛应用[4～12] 。本研究利用QuEChERS前处理方法对食用菌中荧光增白剂进行净化处理， 平行定量浓缩仪浓缩提取液， 采用UPLCMS/MS进行测定， 建立食用菌中7种常用的荧光增白剂的检测方法。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器、试剂与材料 　　Ekspert Ultra LC100超高效液相色谱系统、AB5500三重四极杆质谱仪（美国AB公司）； BECHMAN Coulter Avanti J26XP超高速冷冻离心机； 平行定量浓缩仪、再循环冷却系统B740、真空泵V700/701（瑞士BUCHI公司）； 涡旋振荡器（德国IKA公司）； DTYB1200（电子天平， 福州华志科学仪器有限公司）。 　　标准品： C.I. 162（纯度≥94.0%）、C.I. 140（纯度≥94.0%）、C.I. 135（纯度≥95.0%）、C.I. 185（纯度≥98.0%）、C.I. 367（纯度≥98.0%）、C.I. 393（纯度≥98.0%）和C.I. 184（纯度≥98.0