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Tips BRET检测要求： 同时能够进行快速的双波长切换 灵敏的检测系统（滤光片） 260 nm 260 nm 核酸蛋白定量-吸收光法 260nm下核酸浓度定量 280nm吸收峰蛋白浓度定量（原位法） 采用酶标仪可以实现高通量准确核酸定量 检测原理： 荧光法进行核酸定量 新研究方向-生物能源 第一代生物燃料：谷物－葡萄糖－乙醇 第二代生物燃料：有机含纤维素材料－葡萄糖－乙醇 第三代生物燃料： 海藻－脂质－生物燃料 葡萄糖氧化分析（酶学、发酵） 优异菌株筛选 培养环境优化 多功能微孔板检测仪小结 1 应用非常广泛 2 检测的方式方法不同对仪器的功能要求不同 3 需要根据具体实验灵活选择检测器的功能 4 根据实验的可以设计适合的检测方法 系统组成浏览 EX Dual Mono 吸收光检测器 PMT2 底部荧光 顶部荧光 EM Dual Mono PMT 1 发射光 * * * * * * * * 细胞增殖研究的常见方法 1.胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）渗入法 2. MTT检测法 3.羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法 4. Brdu检测法 5. ATP 化学发光检测法 对照 (无药物刺激) 测试 1 2 3 该分析用于筛选具有抑制细胞增殖的候选药物: Alamar Blue 仅能染活细胞 荧光强度与活细胞数成正比 与细胞毒性分析原理相同 细胞毒性和细胞增殖-荧光法 1 2 3 该分析用于筛选具有抑制细胞增殖的候选药物: 基于对ATP的检测 细胞与药物孵育，测试时进行裂解 通过发光法检测ATP浓度 细胞毒性分析采用同样原理 细胞毒性和细胞增殖-发光法 对照 (无药物刺激) 测试 1 2 3 该分析用于筛选具有抑制细胞增殖的候选药物: MTT 或 XTT 是仅活细胞才能作用的底物 增殖 (或毒性测试后), 加入MTT 或 XTT 光吸收强度和活细胞的数目成正比 细胞毒性和细胞增殖-吸收光法 对照 (无药物刺激) 测试 报告基因 蛋白/酶 (如激酶) 离子通道 ROS GPCR 核受体 基于细胞学的分析 Luminescence Absorbance Fluorescence Polarization Luminescence Luminescence 细胞毒性, 细胞增殖 Luminescence Absorbance Fluorescence 细胞迁移 Fluorescence TRF / TR-FRET Polarization Luminescence TRF / TR-FRET Polarization Luminescence 细胞迁移是损伤愈合以及免疫应答过程中，细胞的一种基本活性功能 细胞迁移功能异常, 或侵袭至异常位置是很多疾病中的关键因素，如愈合功能时长或癌症等 对于细胞迁移功能的研究可以用于药物的研发 加入不同潜在化合物来调节细胞的运动机能成为药物筛选的一种方法 细胞的粘附侵袭和迁移是细胞保持内稳态的一种功能，与创伤、血管再生、肿瘤、免疫、药理等关系密切。 细胞侵袭和迁移-荧光法 细胞侵袭和迁移-荧光法 1细胞培养于无血清的内室 2 外室的培养液中加入血清及趋化因子 3 分离外膜细胞 4 荧光染料染色定量 Innocyte Cell Migration /Adhesion/Invasion Assay Kit for Microplate - Merck 细胞迁移-荧光法 细胞迁移-荧光法 报告基因 蛋白/酶 (如激酶) 离子通道 ROS GPCR 核受体 基于细胞学的分析 Luminescence Absorbance Fluorescence Polarization Luminescence Luminescence 细胞毒性, 细胞增殖 Luminescence Absorbance Fluorescence 细胞迁移 Fluorescence TRF / TR-FRET Polarization Luminescence TRF / TR-FRET Polarization Luminescence DNA Ions 离子通道在信号传导，神经、心血管以及肌肉组织中都扮演重要角色 离子通道检测通常采用离子敏感性和电压敏感性染料，荧光信号的变化取决于细胞内离子浓度的变化 : VSP from Invitrogen * Fura-2, Fluo-4 calcium indicators * FLIPR calcium assays (MD) … 离子通道 Extracellular Intracellular + + + _ _ _ 离子通道可以被各种 离子通道激活开启，允许离子穿过细胞膜，并在细胞膜的局部产生极性改变 离子通道 DNA Ions 钙离子荧光指示剂 比