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第一部分 质粒提取试剂盒 质粒提取是分子生物学实验中最基本、最常用的实验技能之一，质粒提取质量的 好坏直接影响到后续的其他实验，因此，在开始实验之前要针对实验的目的进行质粒 提取试剂盒的筛选。 普通质粒提取试剂盒：适用于宿主菌不含核酸酶的菌株，如常用的 TOP10 和 DH5 α等，所提质粒能满足大多数的分子生物学实验，如：酶切、PCR、转化、测序等。 高纯度质粒提取试剂盒：在普通质粒提取试剂盒的基础上增加了去蛋白试剂，适 用于所有的宿主菌株，所提质粒除能满足酶切、PCR、转化、测序外，还能用于低敏 感性细胞株的转染。 无内毒素质粒提取试剂盒：在高纯度质粒提取的基础上增加了清除内毒素的试 剂，适用于所有宿主菌株，所提质粒不含内毒素，除能满足酶切、PCR、转化、测序 外，还能用于所有培养细胞株的转染。 本公司生产的质粒提取系列产品，采用碱裂解法处理菌体，硅胶膜特异吸附法纯 化质粒，最大限度地去除了菌体的杂质部分，整个操作过程简便、快速，所得质粒纯 度高，可用于微生物的转化、培养细胞的转染、序列测定、酶切、PCR 等一系列常规 分子生物学实验。 质粒简介 质粒 （plasmid ）是低等真核生物细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复 制的遗传单位，现在习惯上用来专指细菌(如大肠杆菌：图 1）、酵母菌和放线菌等生 物中染色体以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体(vector ）。 目前，已发现有质粒的细菌有几百种，绝大多数细菌质粒都是闭合环状DNA分子 （简称cccDNA ）。每个细胞中的质粒数主要决定于质粒本身的复制特性。按照复制性 质，可以把质粒分为两类：一类是严紧型质粒，当细胞染色体复制一次时，质粒也复 制一次，每个细胞内只有 1 ~ 2 个质粒；另一类是松弛型质粒，当染色体复制停止后 仍然能继续复制，每个细胞内一般有 20 个左右。这些质粒的复制是在寄主细胞的松 弛控制之下进行的，每个细胞中含有 10 ~ 200 个拷贝，如果用一定的药物处理抑制寄 主蛋白质的合成还会使质粒拷贝数增至几千个。 图 1. 大肠杆菌质粒分子结构示意图 质粒载体 细菌质粒是重组 DNA 技术中常用的载体。质粒分子本身是含有复制功能的遗传 结构。质粒还带有某些遗传信息，所以会赋予宿主细胞一些遗传性状。其自我复制能 力及所携带的遗传信息在重组 DNA 操作（如基因扩增、筛选）过程中都是极为有用 的。 质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的。与天然质 粒相比，质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因（如抗生素抗性基因 ） 和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的 多克隆位点 序列（multiple cloning site, MCS ），并去掉了大部分非必需序列，使分子量尽可能减少，以便于基因 工程操作(如pUC18 质粒：图 2) 。大多数质粒载体带有一些多用途的辅助序列，这些 用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克隆（如蓝白斑筛选）、产生用于序列测定 外源基因的大量表达等。 的单链DNA 、体外转录外源DNA序列、鉴定片段的插入方向、 图 2 pUC18质粒结构示意图 一个理想的克隆载体大致应有下列一些特性： ⑴分子量小、多拷贝、松弛控制型； ⑵具有多种常用的限制性内切酶的单切点； ⑶能插入较大的外源 DNA 片段； ⑷具有两个以上的遗传标记物，便于鉴定和筛选。 ⑸对宿主细胞无害。 常用的质粒载体大小一般在 1 kb 至 10 kb 之间，如 pBR322 、pUC 系列、pGEM 系列和 pBluescript （简称pBS ）等。 质粒载体的特征 所有的质粒载体都有三个共同的特征：一个复制子、一个选择性标志和一个多克 隆位点。 复制子 复制子是含有 DNA 复制起始位点的一段 DNA （ori ）序列，也包括表达由质粒编 码的复制所必需的 RNA 基因序列、蛋白质基因序列等。 选择性标志 选择性标志对于质粒在细胞内