质谱、色谱分析诊断.pptx

质谱、色谱分析诊断;;;一、质谱学的发展历史;质谱学的历史事件;1952年，Martin 气相色谱方法;1989年，J. B. Fenn 电喷雾电离;常用概念;A;;解决问题的思路;质谱仪器原理;;;电子轰击电离源 (EI); 在电子轰击电离中，样品分子M受到一定能量的 (如70 eV) 的电 子轰击后，生成分子离子 。有机化合物的电离能在10 eV左右， 所以 具有很高的过剩能量，还可能进一步碎裂，产生碎片离子 F+等。 这些离子在离子源中被加速电压 (Vacc) 加速后具有一定的动能：;; 利用反应气体的离子与样品分子相互反 应，而使样品分子离子化，本质是化学过程， 故称化学电离。 离子出品的缝隙减小，使高子室内的压力 保持在0.5-1.0Torr。 电子轰击化学电离气体，不直接作用于样 品分子。 推斥电极电压：0V，增加源内停留时间， 有利于离子-分子反应。 化学电离试剂：甲烷、异丁烷、氨气，氢 气，水、甲醇、胺等。;以甲烷为例，化学电离源内的有关离子-分子反应， CH4 + e CH4+ + CH3+ + CH2+ + CH+ + C+ + H2+ + H+;快原子轰击(Fast Atom Bombardment, FAB), Ar原子; 基质 甘油 硫甘油 间硝基苄醇 二乙醇胺 三乙醇胺 硫代二甘醇 二硫苏糖醇 二硫赤糖醇(5:1) 四亚甲基砜 聚乙二醇; 试样溶解或悬浮于基质中，激光 束辐射到基质和试样分子上。 基质吸收激光束能量后汽化，部 分试样分子伴随基质的汽化而解 吸。 基质吸收大部分激光能量，减少 了试样分子被激光能量破坏及过 度电离成碎片离子。;;蛋白质组分析。;MALDI 的应用; 胰岛素由A、B两个肽链组成。人胰岛素(Insulin Human)A链有11种21个氨基酸，B链有15种30个氨基 酸，共16种51个氨基酸组成。其中A7(Cys)- B7(Cys)、A20(Cys)-B19(Cys)四个半胱氨酸中的巯 基形成两个二硫键，使A、B两链连接起来。此外A链 中A6(Cys)与A11(Cys)之间也存在一个二硫键。;;毛细管 直径0.1~0.2mm。;;多电荷离子的有关计算;例;;;The ESl Process;ESI 方法的主要开拓者是 M. Dole 和 J. B. Fenn 等人。ESI 于;ESI 所能承受的液体流量通常为 1 ～ 20 μ l/min。向喷雾区引入一股逆向 的氮气流可以促进雾状液滴的脱溶剂过程。而在内衬的弹性石英管与 金属毛细管之间增加一股同轴的助雾化气流可使液体流量提高到 2 ml/min， 这样，可使 HPLC与质谱直接联用。;;发生稳定喷雾的条件;垂直喷雾;结构;毛细管样品送入加热管中，该管可以达到300oC以上。 在加热管中溶剂挥发。;;;;质谱仪器原理;质量分析器;;问题解决了么？;在离子源产生的离子当中，质量相同的离子应该聚在一起，但由于离子初始能量不同，经过磁场后其偏转半径也不同，而是以能量大小顺序分开，即磁场也具有能量色散作用。这样就使得相邻两种质量的离子很难分离，从而降低了分辨率。;;质量相同而能量不同的离子经过静电电场后会彼此分开。 如果设法使静电场的能量色散作用和 磁场的能量色散作用大小相等方向相反，就可以消除能量分散对分辨率的影响。 只要是质量相同的离子，经过电场和磁场后可以会聚在一起。另外质量的离子会聚在另一点。改变离子加速电压可以实现质量扫描。;双聚集 方向聚焦：磁场和电场，大小相同，方向相反，互补作用，使不同方向的离子 聚焦于检测狭缝处， 能量(速度)聚焦：磁场和电场，大小相同，方向相反，使不同能量的离子聚焦 于接收器狭缝处。;;质量分析器;四极杆分析器的基本要素;;2009-1 V1;;2009-1 V1 biomass.fudan.edu.cn;;;2009-1 V1;2009-1 V1 biomass.fudan.edu.cn;四极杆长度的影响;质量分析器;三、离子阱质量分析器(Ion Trap Mass Analyser, IT);;有人曾这么比喻：如果哪一天上帝允诺帮每个人实现一个愿望，十个原子光谱学家中，大概有九个都会希望上帝做同一件事──以他伟大的神力把一个原子或分子一动也不动地固定在空间中某一点，好让这些科学家把光谱线量到无比精确。;;离子肼中离子的运动，可以由 Mathieu 方程给出：;;图中，有若干相互交叉的曲线，称为等β线。从左到右的曲线是从0 ～ 1的等 βz 线；从上到下的曲线则是从0 ～ 1的等 βr 线。 ;质量分析器;