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环境雌激素的识别环境雌激素的识别 环境雌激素环境雌激素的识别的识别 为了更全面更深入的研究内EEs并评价其对人类和动植物的危害，有必要对其进行检测 和鉴别，探讨EEs与出生缺陷的因果联系，识别环境污染物中的EEs 。 （一） 物理检测技术物理检测技术 物理检测技术物理检测技术 物理检测一般是用色谱仪器（如液相色谱和气相色谱）进行分析。色谱分析技术对含 EEs样品的前处理过程要求较高，需要从复杂的基质样品中将低浓度的目标化合物高效提 取、纯化和浓缩。随着色谱检测技术与质谱检测技术的结合，检测分析的选择性和灵敏度得 到了很大的提高，检测范围进一步扩大。 总之，做为色谱分析前处理的萃取只能提取一类 或几类物理性质相似的EEs ，而要完全分析样品，必须采用不同的萃取、纯化方法分别提取 与分析，因此耗时较长，费用也较大。 （二） 生物检测技术生物检测技术 生物检测技术生物检测技术 生物检测是建立在EEs在体内的作用机制及产生的生物效应的基础之上的。生物检测包 括体内实验（In vivo test ）与体外实验（In vitro test ）。 1. 体内实验 体内实验主要包括哺乳动物实验、非哺乳类脊椎动物实验（包括鸟类实验、两柄类实验 和鱼类实验等）、无脊椎动物实验（包括蚤类实验、糖虾繁殖实验等）（宋福永 等，2004 ）。 在动物实验中，目前所用的受试动物主要为啮齿类动物，如大鼠、小鼠等。方法有子宫增重 大实验、阴道细胞涂片实验、雌性动物青春期实验、雄性动物青春期实验、睾丸摘除实验、 两代繁殖实验等。 子宫增重大实验是检测雌激素活性的经典方法，选用未成年或成年后切除卵巢的雌性大 鼠或小鼠，连续皮下注射受试物或较长时间饲以含有受试物的食物，一段时间后处死动物， 迅速剥离子宫，称取子宫的湿重和（或）干重，计算子宫脏器系数，测定子宫过氧化酶的活 力，检测子宫血管渗透性等，用这些指标的变化大小综合评定受试物的雌激素样活性与强度 （宋福永 等，2004 ；王涛 等，2004 ）。 啮齿类动物青春期实验分别以未成熟的雄性或雌性动物暴露于EEs ，通过检测雌性动物 性器官和第二性征的发育，来评价化合物的雌激素活性。哺乳动物两代繁殖实验则是研究化 合物对哺乳动物的剂量反应特性以及繁殖发育的负效应（宋福永 等，2004 ）。 阴道细胞涂片实验是以动情周期为4天的大（小）鼠为试验对象，切除卵巢12周内对其 进行染毒后观察阴道细胞的角化情况（染毒后在48小时～72小时内发生角化）。该法特异性 较高，但与子宫增重法相比。灵敏度不高。 对产卵脊椎动物如鸟、鱼、爬行动物和两栖动 物等。可通过检测动物体内的卵黄蛋白素的合成来确定有无内分泌干扰活性。 2. 体外实验 体外实验主要有细胞培养实验、受体结合实验、体外芳香酶活性抑制实验、分子生物学 检测技术等几种（宋福永 等，2004 ；王涛等，2004 ）。体外实验的设计主要根据EEs在体 内的作用机制，如类雌激素在体内与17β雌二醇竞争结合雌激素受体。 细胞培养实验是利用细胞对雌激素或具有雌激素样作用的物质可产生特异性反应，通 过观察细胞生长曲线或测定特异性蛋白含量，来判断受试物的雌激素活性和强度。用细胞培 养法检测内分泌干扰物的方法主要有：MCF7细胞增殖试验、酵母报告基因试验和哺乳动物 细胞报告基因试验。所用的细胞系ZR751细胞（此三者皆为人乳腺癌细胞系）、有MCF7 细胞、T47D细胞、Hela细胞（人宫颈鳞癌上皮细胞系）、大鼠子宫原代细胞、大鼠垂体原 代细胞、鼠淋巴细胞经基因转染的Lec9细胞等。而细胞增殖常用的是MCF7细胞（解玮 等， 2004 ），优点在于能反映EES对人体的作用，且操作简单、灵敏度较高。而细胞特异性产物 测定常用的是卵黄蛋白原（vitellogenin，VTG ）。由于卵黄蛋白原具有高度的特异性、高度 的灵敏性及标本的取材灵活广泛等特点，所以在雌激素鉴别中，可以作为很好的生物标志物 （biomarker ）（周庆样 等，2003 ）。 MCF7细胞增殖试验 将MCF7细胞培养在含有经5％活性炭，葡聚糖处理的胎牛血清和 含不同浓度受试物的培养基中，以17β雌二醇为对照，6天后终止培养，磺基罗丹明B （SRB） 染色，用酶标仪在540nm读取吸