兔骨折愈合早期蛋白质谱分析研究.pdfVIP

广 西 医 科 报 joURNALOFGUANGXIMEDICALUNIVE TY 2012D…ec；’29(6) DIC vERSITY ·849 · 兔骨折愈合早期蛋白质谱分析 何 肖丞 苏 伟△ 谢能锋 郭 杰 李 尚政 (广西医科大学第一附属医院创伤骨科 中心 南宁 530021) 摘要 目的：观察骨折愈合早期骨痂中的蛋 白质含量、种类与正常骨质的差别，寻找影响骨折愈合过程的差异蛋 白分子。方 法：随机选取家兔 1O只，建立右上肢桡骨骨折模型(实验组)以对侧正常骨组织对照 (对照组)。4周后取出骨痂并提取骨组织 蛋 白，测定蛋白质浓度后 ，行 SDS-双 向凝胶 电泳、ImageMaster2DE软件分析 ，对差异蛋 白质点采用基质辅助激光解吸一 电离 飞行时间质谱测定肽质指纹图谱并查询 NCBInr数据库。结果：获得分辨率高且具有可重复性的双向电泳银染图谱。图像分 析检测骨痂组织平均蛋 白点数实验组为 732±21，对照组为 698±31。找出差异蛋 白点 15个，初步鉴定出差异表达蛋白质点 8 个 ，包括巨噬细胞移动抑制因子、泛素 ／核糖体蛋 白$27A融合蛋 白、原肌球蛋 白口一异构体 2、磷脂结合蛋 白1、谷胱甘肽 转移 酶、磷酸丙酮异构酶 1、果糖二磷酸醛缩酶A、肽基脯氨酰顺反异构酶A。其中5个差异点早期表达均上调，2个差异点表达下 调，1个差异点仅在实验组中表达。结论：骨痂组织与正常骨组织的蛋 白质表达存在明显差异，这些差异蛋 白可能在骨折愈合 的发生发展中发挥作用 。 关键词 骨折愈合；蛋 白质谱；双向凝胶 电泳；兔骨折模型 中图分类号 ：R683．41 文献标志码 ：A 文章编号 ：1005—930X(2012)06—0849—03 骨折 的愈合是多种生物 因子参与的复杂生理过程 ，骨折 MALDI-I’OF(Amersham Pharmacia)。 延迟愈合 以及骨不愈合严重影响患者的生活质量 ，骨痂组织 1．2 方法 中多种蛋 白质在其过程中对细胞增值分化及代谢起调控作 1．2．1 骨折模型的建立：每只家兔耳缘静脉麻醉后，剔除右 用。 目前蛋 白质组学的研究虽已成为热点，但骨痂蛋 白在骨 上肢手术区域兔毛，铺 巾、消毒。右上肢前臂桡侧切开皮肤 ， 折愈合过程中的作用研究甚少。本文通过蛋 白组学技术在 钝性分离软组织，切开骨膜 。用咬骨钳在腕关节上方 3cm 整体水平上研究参与骨折愈合过程的蛋 白质，并通过对差异 处咬断桡骨并咬除 0．3～O．5cm骨组织 。缝合包扎伤 口，术 蛋 白的分析 ，获得参与骨折愈合调控 的蛋 白质靶点。有助于 后无需固定 。连续 3d40万 U青霉素按 1万～2万 U／kg肌 后续从蛋 白质水平阐明骨折愈合 的机制 ，更有针对性的促进 肉注射防止感染 。4周后 (模拟骨折早期)取 出骨痂组织与对 骨折愈合。 侧正常骨组织 。 1．2．2 总蛋 白质提取 ：实验组及对照组取 出的骨组织标本 l 材料与方法 分别提取总蛋 白质 ，取 0．3g骨组织 ，放人遇冷双蒸馏水中反 复冲洗骨髓腔 ，剔除骨膜及残 留的软组织 。剪碎后按每克骨 1．1 材料 组织 300 L的比例加入细胞裂解液及终浓度为 1mmol／L 1．1．1 组织来源：由广西医科大学动物实验 中心提供的健 的PMSF，低温下匀浆及超声破碎 ，4℃裂解 8～12h。然后 康雄性新西兰成年家兔 1O只，体重 2．0～2．2 ，实验动物