兔角膜内皮细胞载体的体外培养及移植的研讨.pdfVIP

覆建lq 第三届海洋生物骞技术抡坛 200s．08．19-23 兔角膜内皮细胞载体的体外培养及移植的研究+ 位晓娟1刘万顺+韩宝芹陈列欢 (中国海洋大学海洋生命学院青岛266003) 杨朝忠 (青岛东方眼科医院青岛266021) 摘要以特定曲率的壳聚糖．硫酸软骨素共混膜为载体，构建兔角膜内皮。研究了兔角膜内皮 细胞在载体上的细胞贴附性、细胞形态及膜强度等性质。结果表明，该共混膜有良好的细胞 贴附性及机械强度：兔角膜内皮细胞可在共混膜上长成良好的单层，细胞形态较好，并有较 强的贴附牢固度。将培养好的载体植入到去除内皮层的兔角膜中，术眼在56天内基本保持 透明，说明体外构建的内皮可执行角膜内皮层的部分功能。 关键词角膜内皮细胞，载体，培养，移植 角膜的高度透明性和光学性是正常发挥生理功能的必要条件之一，而角膜内皮细胞 (cornealendothelialcell，CEC)在维持角膜的正常生理功能方面起重要作用【IJ。角膜内皮细 胞是角膜后层的单层细胞，构成了后弹力层和房水之间的物理屏障，通过离子“泵”功能调节 角膜中离子浓度和水分，维持角膜的半脱水状态，保证角膜的正常厚度和透明度瞄。J。研究证 明‘6-101，脊椎动物的角膜内皮在胚胎期具有有丝分裂能力，但出生后细胞停滞在GdGl期， 分裂活动停I}=。大多数灵长类动物(包括人)的角膜内皮细胞属终末分化细胞，几乎允有丝 分裂能力，Jl：且随印龄的增长细胞密度以O．3．0．6％的速率逐渐减少。角膜内皮损伤肝，临近 细胞扩张、移行，很快覆盖受损Ix．域，但当内皮损伤达到某一临界值时，残存内皮的代偿难 以维持角膜内皮单层的完整，就会造成功能失代偿，导致角膜基质层水肿、角膜混浊，严重 时将引起盲目。每年仝雌界有100万以上的忠者网角膜内皮细胞功能失代偿而导致失明。目 前，穿透性角膜移植术是取代病变或受损的内皮细胞恢复角膜透明性的唯一方法，虽然手术 成功率高，但是受到供体来源的短缺、供体的老龄化及术后并发症等现状的制约。 闪此， 寻求可用了二移植的角膜，扩大供体来源，成为急需解决的问题…以31。1972年Maurice首次 提出了将组织培养的角膜内皮细胞移植到内皮细胞不健康的角膜上的设想，开辟了角膜内皮 细胞移植这一崭新的研究领域【l41。近20年来，随着组织工程的兴起，利用组织丁：程技术构 建活性人T角膜成为诸多学者关注的热点。活性人工角膜的核心是体外构建角膜的等效物， 达到永久性修复和重建损伤角膜f内目的，彻底解决角膜供体的来源及质量问题。迄今为+Il：， 被作为角膜细胞培养贴附载体的材料包括：异体角膜片，明胶薄膜，水凝胶膜以及后弹力层 膜等‘”√61，Ji：且，以以上材料为载体构建角膜上皮、基质层已见报导‘17—81，尽管它们有良 +国家“卜五”863汁划(2001AA625050)和围家自然科学綦金资助项I：1 1女，1981年生，博l：生；研究方向：海洋生物化学 +通讯作者。Emaii：WanshunLiu@hotmail．corn 362 福建蠢门 第三届海洋生铂高技术论坛 2005．08．19-23 好的生物相容性，但降解速度过慢或过快，机械强度不足等问题，制约了其临床应用。 本实验以体外培养的兔角膜细胞为材料，以本实验室研制的可生物降解的壳聚糖一硫酸软 SufateBlend 骨素共混膜(Chitosan—ChondroitinMembrane，Ch．Cs共混膜)为角膜内皮细胞贴 附载体，进行了兔角膜内皮细胞在载体上的细胞形态、贴附牢固度及膜强度等方面的研究， ，{二就兔角膜内皮细胞载体的植入做了初步的探讨。 1材料与方法 1．1材料 学院生物丁程研究所)；青霉素钠、硫酸链霉素(石家庄制药集团有限公司)；bFGF(鼹南大 学周长忍教授提供)；壳聚糖、硫酸软骨素(本实验室制备纯化)：海洋生物活性提取物(N一 乙酰氨基葡萄糖，壳寡糖，CM一壳寡糖，本实验室制备并纯化，纯度分别为99．82％，99．91％， 99．80％)。 1．2主要仪器 IX70倒置式系统显微镜(日本)。