蒜粉中蒜氨酸酶的分离纯化及性质测定.PDF

植物生理学通讯 第40卷 第3期，2004年6月 355 蒜粉中蒜氨酸酶的分离纯化及性质测定 苟萍 李燕l’王荣 陈坚 1新疆大学生命科学与技术学院，乌鲁木齐830046；新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 830054 PurificationandPropertiesofAllinasefrom GarlicPower GOUPing．LIYan ‘，WANGRong,CHENJian CollegeofLfieScienceandTechnology,XinjiangUniversity，Urumqi830046；CollegeofMedicine，XinjiangMedicalUniversiyt Urumqi830054 提要 蒜粉以Na／K磷酸缓冲液抽提、25％--40％(NH)2So4分级沉淀后，用SephadexG一200柱分离得到纯化200倍的电泳纯 蒜氨酸酶。测定其性质的结果表明，此酶在25℃下对半胱氨酸亚砜的 。为0．87mmol·，y眦l为0．46Ixmolm·in一，最适反 应温度为40℃，热稳定性的温度范围在45℃以下，最适pH为6．6 关键词 蒜粉；蒜氨酸酶；分离纯化；性质测定 大蒜为百合科葱属植物，有丰富的营养成分 基苯肼充分反应后，再加入5mL0．5molL·NaOH 和药用价值。它在杀菌 、抗血栓 、防治动脉硬 摇匀显色，用752紫外光栅分光光度计测波长520 化、预防和治疗中风和高血压等方面有显著的疗 am处的光吸收(OD)值。 效 ，近年来又发现在防治肿瘤中也有独特 的作 4蛋白质浓度测定 用 ”【。新疆大蒜因地理和气候的独特性，其药用 按Lowry方法 【。 成分含量高，有广阔的开发利用前景。大蒜中有 5聚丙烯酰胺盘状电泳 药理作用 的物质为一类含硫化合物——蒜素 7％的分离胶，2．5％的浓缩胶，0 molL·Tris一 (allicin，主要成分是二烷基硫代亚磺酸酯和烷基一 甘氨酸缓冲液(pH8．3)，以考马斯亮蓝G．250为染 2一丙烯基硫代亚磺酸酯等)。蒜氨酸酶(alliinase， 色剂，甲醇、水、浓氨水(64：36：1)为脱色剂， EC4．4．1．4)催化蒜氨酸(alliin，烯丙基硫代半胱氨酸 7％乙酸透明保存。 亚砜)生成丙酮酸、氨及含硫化合物蒜素等 【“。本 实验结果 文研究了从蒜粉中提取蒜氨酸酶的方法及蒜氨酸 酶的性质 。 1酶的分离纯化 称取4Og蒜粉用4倍体积的0．1molL·Na／K 材料与方法 磷酸缓冲液(pH6．5)抽提。先在冷冻条件下研磨 1材料 20min，4℃下以2000xg离心20min，收集上 新疆蒜粉(新疆吉木萨尔蒜，Alliumsativum) 清液 。沉淀加少量上述磷酸缓冲液重复抽提 2 为新疆医保公司产品。 次 ，弃去沉淀 ，上清液为粗酶液 。 2底物制备 粗酶液分别加20％～70％饱和度的硫酸铵沉 参照孙君社和高孔荣2[1的方法制备底物L一半 淀，于冰箱中放置2～4h后，4℃下以 2000xg 胱氨酸亚砜。 离心30min，沉淀用少量0．1molL·。Na／K磷酸 3酶活性测定 缓冲液(pH 6．5)溶解、定容，测定酶活性 。图 以L一半胱氨酸亚砜为底物，用丙酮酸法测定 l结果表明，硫酸铵饱和度在30％~35％时酶活性 酶活性，以在25℃条件下，每分钟产