羊栖菜多糖的制备及其对HepG2细胞的抑制作用研究.pdfVIP

这些多糖对各种外周血中淋巴细胞及人类细胞株上感染的眦v-1均是强抑制剂。它们与靶细胞作用， 来抑制病毒的入侵，而非直接与病毒颗粒作用，这些硫酸多糖可抑制由HIV-I对CD．+和CD．一细胞株的感 染。 研究证明：HIV侵入靶细胞的胞浆较慢，使硫酸多糖有足够的时间在细胞膜上与HIV作用。 硫酸化多糖作用的分子机制： ．乙 天然和合成的硫酸化聚阴离子(SP)可抑制HIV感染及阻断抗CD．单克隆抗体的结合。众多的研究 检验了SP的作用模式n削。抗CDt单抗结合抑制研究揭示了一个SP在CD．上的结合位点，这一位点虽与 HIV gpl20结合区紧密相关，但有明显不同。葡聚糖硫酸盐(500kDa)、聚乙烯硫酸盐、聚茴香脑磺酸盐 对已知的11个单抗与CD。上类似于lg的两个氨基端的结合有很强的抑制作用。葡聚糖硫酸盐对抗C队 单抗的严格等级抑制表明，SP是结合于一与C阢上第一个19类似区相连的构象位点。这一SP结合位点 相互作用。这是DS和PVS等的作用机制，而肝素、岩藻多糖、角叉莱胶等的作用机制还不完全在于对 作用与CDt相关，很可能通过一种与CD4无关的机制抑制HIV感染。 重组gpl20几乎不与所有固相化的聚阴离子结合，放射标记的Vs环肽与聚乙烯硫酸盐、DS(500kDa) 正电位点【15’。这V。环对病毒吸附与细胞表面是必需的。这一机制可解释聚硫酸盐对抗包膜病毒的广谱抑 制活性。 参考文献(略) 羊栖菜多糖的制备及其对HepG2细胞的抑制作用 岑颖洲”，马夏军1，王凌云’，许少玉1，王一飞2，张美英2 (1．暨南大学化学系，；2．暨南大学生物医药研究开发基地，广东广州510632： 3．佛山农林技术推广中心，广东佛山528000) 海藻羊栖菜(Sargassumfusifo脚e)属褐藻门马尾藻科植物。我国自古以来就有用它入药的习惯， 南齐陶弘景的《神农本草经》及李时珍的《本草纲目》都有记载。近年来的研究表明，羊栖菜具有抗肿 瘤活性，并且其抗肿瘤活性的主要集中在羊栖菜多糖(saTgassuNfusiforme 上。SFPS是从全藻中提取到的一种水溶性多糖，包括褐藻酸(alginic ·358· 效b’，这些都是单独考察了SFPS的抗肿瘤活性。我们提取了SFPS再对其逐步分离、水解制备一系列羊 栖菜多糖，通过对比分析对羊栖菜多糖的体外抗肿瘤活性作了进一步研究。 1．材科与仪器 1．1材料 羊栖菜SargassumfusifolT曰e采自广东省汕头市南澳海藻养殖场：四甲基偶氮唑盐 (3一(4，5-Dimethylthiazol-2一y1)一2，5-diphenyltetrazolium 烷基磺酸纳(SDS)，美国Promega公司：RPMl640型培养基，GIBCOBRL公司：小牛血清，杭州四季清公司：顺 铂，锦州九泰药业有限责任公司：其它试剂均为分析纯。 1．2仪器 COz培养箱，日本Sanyo公司：超净工作台，苏州净化设备公司：相差显微镜， 德国Laica 公司：酶标仪，美国BIO-RAD公司。 2．实验部分’ 2．1羊栖菜多糖的制备 2．1．1 SFPS的提取 羊栖菜按通过正交试验确定的最佳提取工艺：温度8012，加水量50倍，pH值5及时间5h，提取 两次，过滤，合并滤液，浓缩后加无水乙醇至最终体积分数为75％，413下静置过夜。离心烘干得SFPS。 2．1．2乙醇、氯化钙分级法分离SFPS 清液中继续加无水乙醇至最终体积分数为75％，沉淀，离心后沉淀物水溶，加IO％CaCl：溶液，静置过夜， 离心得褐藻酸钙。取清液，浓缩，透析至检测不到C1一为止，向清液中加无水乙醇至体积分数为75％， 沉淀过夜，离心得FPS。 2．1．3 FPS水解 取FPS 3份，用硫酸分别按以下条件水解：pH为l，9012下水解2．5h；pH为l，8012下水解5h； pH为2，80℃下水解5 h。离心后取清液用无水乙醇沉淀，烘干沉淀得水解多糖，依次为FFSHI、FFSH2、 FPSH3。 2．2．4硫酸根的测定