羊栖菜中褐藻糖胶的组分分析研讨.pdfVIP

研究论文综述 2004年全国生物技术学术研讨会论文集 羊栖菜中褐藻糖胶的组分分析研究 zb-世-．E1,2严成钊2袁勤生1 (1华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海200237； 2上海市工业微生物研究所，上海200233) 摘要： 热水抽提的羊栖菜多糖，去除褐藻胶、海带淀粉后剩余的褐藻糖胶经过DEAE— 4B凝胶层析柱被分成5个褐藻糖胶组分。5个组分中硫 Sepharose离子交换色谱柱和Sepharose x x x 为2．0×104、2．2104、8．2×104、21．4104、32．0 104；百分含量分别为8．6％、22．9％、48．5％、 5．7％、14．3％． 关键词：羊栖菜，褐藻糖胶，组分分离 羊栖菜[Sargassum 其组成可分成三部分：海带淀粉、褐藻胶，和褐藻糖胶。褐藻糖胶是一种水溶性的多糖。存在 于褐藻细胞间组织中。是具有不同化学组分的一族化合物，属褐藻多糖的硫酸酯，其主要成分 是L．褐藻糖．4．硫酸酯，其次还伴有半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、糖醛酸等。有实验证明， 褐藻糖胶有降血脂…降血糖、抗肿瘤12】，增强免疫力的功能13J，但是褐藻糖胶的上述功能与其结 构之间的关系并未清楚。目前，硫酸多糖构效关系的研究主要集中在硫酸化程度和分子量上， 事实上对硫酸多糖抗病毒、抗血栓的研究也充分证明了分子量与硫酸化程度是影响其功能的重 要因素12．4]，如：肝素在每个糖残基平均含1．5．2．0个硫酸基时生物活性最佳：根据分子量大小对 海带褐藻糖胶进行的乙醇沉淀分级得到的各组分中，60％醇沉淀物抗凝血作用最好等。为了确定 羊栖菜褐藻糖胶中的活性组分，用分子量结合硫酸化程度的分级方法将其分成不同组分。 l材料与方法 1．1材料 羊栖菜(采自浙江洞头县近海养殖场)经水洗，烘干，碾成粉末 1．2方法 1．2．1褐藻糖胶的制备 羊栖菜藻粉一沸水浸提0．5h一取上清液，滤渣同样条件下再提取3次一合并上清液一减压浓 缩至小体积一3倍体积乙醇沉淀一丙酮或乙醚洗涤2次一干燥一褐藻糖胶粗品 粗褐藻糖胶水溶液一加4mol／LCaCl2溶液一沉淀过夜一次日离心去沉淀一超滤一上清液加3 倍体积乙醇一沉淀溶于水一加乙醇至体积的30％一离心去沉淀一上清液继续加乙醇至体积的 70％一离心得沉淀一用丙酮清洗两次一千燥一褐藻糖胶 】．2．2分级纯化方法 1．2．2．1离子交换层析法 FF凝胶(安法玛西亚公司)装柱(5．5×40∞)，用0．02mol／LTris．HCI DEAE—Sepharose pH7．6 NaCl 48 2004年全田生物技术学术研讨会论文集 研究论文综述 的该缓冲液1200ml洗脱，流速300ml／h。收集各部分，脱盐，冷冻干燥。 1．2．2．2琼脂糖凝胶层析法 80enl)，0．2 4B凝胶(安玛西亚公司)装柱(2．6X mol／LNaCI平衡。将样品溶 将Sepharose mol／L 解于0．2MNaCI中，上样。洗脱液为0．2 苯酚法【5】检测至无糖为止。 1．2．3多糖纯度的鉴定方法 Clll 1．2．3．1琼脂糖凝胶层析法鉴定：色谱柱为1．