前列腺癌患者外周血CD8+T细胞中CD28的表达.docVIP

精品论文 参考文献 前列腺癌患者外周血CD8+T细胞中CD28的表达 尤玉红 （黑龙江省医院 150036） 【中图分类号】R737.25【文献标识码】B【文章编号】1672-5085（2012）9-0270-02 T细胞介导的细胞免疫是机体抗前列腺癌免疫的重要机制，CD8+T细胞则是人体前列腺癌免疫应答中的主要成分、随着对T细胞激活机制的深入研究，发现其特异性激活除T细胞受体复合物信号外，还需要共刺激信号。CD28／B7便是其中重要的共刺激信号。研究表明，阻断CD28、B7之间的作用可导致抗原特异耐受。本文采用流式细胞术检测T细胞亚群及CD8+CD28-+T细胞在前列腺癌患者外周血中的表达，探讨共刺激信号CD28在前列腺癌免疫应答中的作用，为进一步的前列腺癌免疫治疗提供理论依据。 1 对象与方法 研究对象从2008年1月～2010年12月经我院确诊27例前列腺癌患者，平均年龄67岁。按国际抗癌联盟TNM分期，Ⅰ期4例，Ⅱ期8例，Ⅲ期10例，Ⅳ期5例。16例正常男性成人外周血均取自健康志愿者，平均年龄63岁。 2 试剂和仪器 小鼠抗人CD8-FTTC、CD28-PE、CD3-FTTC、CD3-PerCP、CD3-APC、CD8-FTTC／CD28-PE、CD8-Percp和CD4-APC均购自BD公司；红细胞表明裂解液为BD公司的FACSTMLysing Solution；PMA、离子霉素、BFA、均购自Sigma公司；RPMI1640培养基购自Gibco公司。 3 实验方法 3.1 细胞表面标志物监测 淋巴细胞三色荧光标汜，所有患者和，厂常对照均做CD3／CD4／CD8、CD3／CD8／CD28及相应的阴性对照。10mu;lTTC、FE、PcrCP标记的抗体或2.5plAPC标记的抗体和45～tl全血室温15min避光孵育后,加入红细胞裂解液避光放置10min，离心，PBS洗涤固定后上机。 3.2 流式细胞仪数抓统计学处理 全部数据用流式细胞仪(FACSCalibur，美国BD公司)和Cellquest3，进行三色或四色荧光参数的获取和分析。每管收50000个细胞。用t检验进行组间数据比较。 4 结果 周围血淋巴细胞表型 前列腺癌患者的CD8+CD28+T细胞数量明显高于对照组(29.4％vs11.2％)；前列腺癌患者的CD8+CD28+T细胞数量明显低于对照组(19.6％vs35.1％)(附图)。 外周血T细胞亚群、CD8+CD2-T细胞、CD8+CD28+T细胞前列腺癌患者CD3+、CD4+、CD8+T细胞表达水平及CD4+／CD28+T细胞明显减少(Plt;0.05)(表1)。 5 讨论 共刺激分子CD28是一相对分子质量为44000的同源二聚体糖蛋白，主要表达于淋巴细胞表面(包括CD4+、CD8+细胞)，其配体B7存在于抗体生成细胞(APC)表面，如树突状细胞，活化的T、B细胞和NK细胞和巨噬细胞等表面。在抗肿瘤免疫中，除特异性刺激信号MHC-抗原肽复合物外，还需CD28和B7相互作用所产生的“第二信号”才能使T细胞活化，形成免疫应答。研究表明，人体抗肿瘤免疫主要为CD8+T细胞。 我们的研究发现前列腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+T细胞水平及CD4+／CD8+比值与正常对照组无显著差异，但CD8+T细胞中CD28分子的表达则有明显不同。前列腺癌患者CD8+CD28+T细胞显著降低，而CD8+CD28-T细胞显著增加。山研究的结果可见，前列腺癌患者外周血，CD8+CD28+T细胞数量的减少，使机体缺乏有效的“第二信号”来活化CD8+T细胞，导致抗肿瘤免疫的下降，肿瘤细胞逃脱机体的免疫攻击。CD8+CD28-T细胞是一群终末分化的细胞毒T细胞、被认为能抑制B细胞及T细胞功能。在很多疾病状态下，如病毒感染(如HIV)，自身免疫性疾病(如SLE)，重度酗酒时，CD8+CD28-T均会增加，且可起保护组织及器官的作用。本实验发现，前列腺癌患者外周血中的CD8+CD28-T细胞比例增加，这可能是前列腺癌细胞激活CD8+T细胞后的应答反应c但具体的信号传递机制及其在前列腺癌免疫中自勺作用仍有待于进一步研究。 本研究结果表明，前列腺癌患者外周血CD8+CD28+T细胞和CD8+CD28-T细胞的共同作用使机体对肿瘤的免疫力下降。从这一现象出发，采用如转染CD28基因、抗CD28单抗等方法提