恩替卡韦联合水飞蓟宾对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞及淋巴细胞亚群的影响.docVIP

精品论文 参考文献 恩替卡韦联合水飞蓟宾对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞及淋巴细胞亚群的影响 赵彩霞 (平煤股份七矿职工医院 河南平顶山 467000) 　　【摘要】目的 观察恩替卡韦(ETV)联合水飞蓟宾(silibinin, SL)胶囊(水林佳)对慢性乙型肝炎(CHB)患者免疫系统中外周血树突状细胞(DC)和淋巴细胞亚群表达的影响，探讨ETV和SL治疗 CHB的可能作用机制。方法 选取我院18例ETV联合SL治疗有效的CHB患者，治疗前、治疗12周、24周后取外周血单核细胞DC进行体外培养，用流式细胞仪检测分析DC表面分子及淋巴细胞亚群表达水平，取10例健康体检者作为正常对照。结果 用ETV联合SL治疗的CHB患者与治疗前比较，治疗12周、24周时DC表面分子CD1a、CD40、 CD83、CD86和HLA-DR的表达明显增加(Plt;0.05)，但均低于正常对照组(Plt;0.05)。淋巴细胞亚群中的CD4+、CD4+/CD8+比值显著提高(Plt;0.05)，但CD3+、CD8+细胞未见明显改变，但均低于正常对照组(Plt;0.05)。结论 ETV联合SL治疗后CHB患者免疫增强，可能通过调节DC和淋巴细胞亚群的功能而参与免疫应答，发挥间接抗病毒作用。 　　【关键词】 慢性乙型肝炎 水飞蓟宾 恩替卡韦 树突状细胞 淋巴细胞亚群 　　【中图分类号】R969 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）03-0147-02 　　树突状细胞(dendritic cells, DCs)是人体内功能强大的专职抗原提呈细胞，在机体免疫反应中起着重要的作用[1]。慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者在清除乙肝病毒(hepatitis b virus, HBV)的过程中发生了免疫病理改变，DCs不能诱导产生大量的特异性T细胞(Th)和T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes, CTLs)，导致HBV迁延侵袭，持续感染。本研究应用核苷类抗病毒药恩替卡位(ETV)联合水飞蓟宾胶囊(水林佳)治疗CHB，观察治疗前、后外周血DC及淋巴细胞亚群表达的变化，进一步探讨ETV联合SL治疗CHB的作用机制。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 自2011年3月至2012年9月选取门诊及住院接受ETV联合SL治疗的CHB患者18例，其中男11例，女7例，年龄19~56岁，平均(38.1plusmn;9.7)岁。入选病例均符合中华医学会传染病与寄生虫分会、肝病学分会联合修订（2000年9月, 西安）的《病毒性肝炎防治方案》慢性乙型肝炎的诊断标准[2]。 　　1.2 仪器与试剂 RPMI1640、rhIL-4、rhGM-CSF(Sigma)。鼠抗人HLA-DR-FITC、CD40-PE、CD83-PE、CD86-PE、CD1alpha;-PE、SimultestTMIMKndash;lymphocyte双色免疫荧光试剂盒(美国AAT Bioquest Inc)。淋巴细胞分离液(中国医学科学院)。胎牛血清(郑州佰安生物工程有限公司)。Flt-L(武汉博士德生物工程有限公司)。二氧化碳培养箱(日本三洋)。流式细胞仪(美国Gallios)。 　　1.3 治疗方法与观察指标 患者口服恩替卡韦(博路定，中美上海施贵宝制药有限公司) 0.5mg/d，水飞蓟宾胶囊(水林佳，天津天士力制药股份有限公司)3粒/次，3次/d，并给予谷胱甘肽、丹参、肌酐、辅酶A等保肝护肝治疗，治疗12周时进行疗效判断。治疗前、治疗12周、24周后分别检测肝功能和乙肝表面抗原，并进行外周血DC培养和淋巴细胞亚群检测。 　　1.4 体外DC诱导分化、培养及表型分析 参照资料[3]，取RPMI 1640液，与等量外周血混合，沿管壁加入淋巴细胞分离液，1500r/min离心分离后取单个核细胞(PBMC)，用含100mL/LNCS的RPMI1640液混悬均匀，调整细胞浓度(3~5)times;106个/ml，在培养箱中温育2 h（37℃、5%CO2），轻轻吸除未贴壁细胞。贴壁的细胞用RPMI 1640液轻洗3次，弃掉洗液。继续加入rhGM-CSF(1000U/ml)、rhIL-4(1000U/ml) ，共培养9d。每3天50%换液并补充相应的细胞因子。培养7~10d后收集细胞并检测。用事先预冷的PBS液洗涤细胞3次，调整细胞浓度为2~3times;1010/L，把鼠抗人HLA-DR-FITC、CDla-PE、CD40-PE、CD83-PE、CD86-PE各20?l加于100 uL细胞悬液中