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达托霉素随pH变化产生的杂质研究夏兴1，2张定丰3苏永槐3饶敏2戈梅2*1上海交通大学，上海2002402上海米益生物药物研发中心，上海2002403浙江医药股份有限公司新昌制药厂，浙江新昌312500摘要：达托霉素是一种新型抗耐药菌抗生素。由于结构特点，其在不同的pH下会产生不同的杂质。利用HPLC分析和制备，获得了5个主要的相关杂质。利用MS分析，对其进行了鉴定，确定了5个杂质的化学结构。关键词：达托霉素；杂质；HPLC分析；MS鉴定StudyoncharacterizationofimpuritiesderivedfromdaptomycinindifferentpHXiaxing1,2Zhangding-feng3Suyong-huai3Raomin2Gemei21SchoolofPharmacy,ShanghaiJiaoTongUniversity,Shanghai200240;2ShanghaiLaiyiCenterofBiopharmaceuticalsRD,Shanghai200240;3ZhejiangMedicineCo.,Ltd.XinchangPharmaceuticalFactory,Xinchang312500Abstract:Daptomycinisanewanti-resistantantibiotic,whichcanderivetovariousimpuritiesindifferentpHsituations.Inthispaper,impurityprofileofdaptomycinindifferentpHwasstudied.UsingHPLCanalysisandpreparation,fiverelatedimpuritiesofdaptomycinwereobtained.ThestructuresofimpuritieswereidentifiedbyMSandMS-MSanalysis.Besidesfourreportedimpurities,anewunreportedimpuritywasobtainedandidentifiedaslactamhydrolysisproduct.Keywords:Daptomycin;Impurities;HPLCanalysis;MS-MSl材料和方法l-l仪器和试剂安捷伦1100液桐I系统；恒温水浴锅。达托霉素注射剂为阿斯利康的克必信：乙腈购丁1l：_『灵威化学技术有限公司，色谱纯：其他试剂均 为分析纯，购丁．闻药集团。1．2实验方法1．2．1达托霉素的降解 分别配制pH2．O、pH4．O、pH6．O和pH8．0的缓冲液。分别称取10mg达托霉素．符臼溶丁．pH2．O、pH4．0、pH6．O、pH8．0和pHlO．O的缓冲液中，定容垒10ml，配制成1m∥ml的达托霉素溶液。将上述秤个pH的达托霉素溶液全丁．室温干u60℃的水浴锅中：升i同时问取样，监控各个样晶中达托霉素和丰u关杂质的变化情况。I．2．2HPLC分析。HPLC分析方法参照文献川。1．2．3栩关杂质的制备根据不同pH下达托霉素的降解情况，利用HPLC对转化液进行了杂质制备，条件沿用HPLC分析条件。1．2．4MS鉴定质谱：waterS质谱Q．ToFPremier质谱仪。方法：ESI，JF离子。毛细管电压为3．0kv，锥孔电压35V， 源内温度100℃，干燥气流温度250℃，T．燥器流速400L／h：碰掩能MS6eV、MS．MS35eV，质量扫描范围nl／z80-2000，扫描时问ls，|1描M隔时盯qO．02s。2结果与分析2．1实验结果符个巧i同pH的达托霉素溶液，在60℃下经过9小时水浴加热后，警现完全1i同的HPLC状况。 符个pH的高温9小时后的分析结果如幽2。_。山P协n哼cln一／“l_{l{ll∥I崎I，|‘n一／i1≯ ；；●；●●●●●●●●，，●●●●-nl：!塞．辫攀j●也一，：一百j*．ld-PIomyc．n／5d．一d郴i“l?／l毒越j上!l一．．；。．。。。Lh● S毒n迭』妇曼生j————一■●205／‘{薯茎￡Ili。：～～ 一辛曼舶o-曼．烹一=二互二=．二二：二￡二=二二l===：二矗二二二二二=i二二图2不同pH下60℃水浴9小时后的HPLC图a为pH2．0，b为pH4．0，c为pH6．0。d为pH8．0，e为0小时对照而其中，pHl0．0时，60℃下1．5小时达托霉素就已完全降解。 HPLC结果显示，60℃时经过9个小时，pH2。0条件下，主要产生了3个相关杂质，为杂质I、杂质2和杂质3；在pH4．0条件下，主要的杂质为杂质3；pH6．0条件下，主要的杂质产物为杂质3、 杂质4和杂质5：而在pH8．0时，主要