靶向B7-H3基因RNA干扰慢病毒的构建及人胰腺癌PaTu8988稳定感染细胞株的建立.pdfVIP

·110 ·论著· 靶向B7．H3基因RNA干扰慢病毒的构建及 人胰腺癌PaTu8988稳定感染细胞株的建立 赵鑫 张光波 李智 干文娟 朱东明 赵华 张子祥李德春 【摘要】 目的构建靶向人B7同源性3(B7一H3)基因的小发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体，并建 立稳定感染的胰腺癌PaTu8988细胞株。方法根据GenBank提供的B7-H3cDNA序列，设计4条靶向 质粒共同转染293T细胞，经蛋白质印迹法筛选出干扰效果最佳的重组干扰质粒。该质粒经慢病毒包 装，并感染胰腺癌PaTu8988细胞株，建立稳定低表达B7一H3细胞株。应用实时定量PCR及蛋白质印迹 法检测细胞B7一H3基因的表达抑制率。结果携带干扰效果最好的shRNA的慢病毒感染PaTu8988细 胞，建立了稳定低表达B7一H3基因的PaTu8988细胞株，其B7一H3mRNA表达的抑制率达96．8％，B7一H3 蛋白表达的抑制率达88．1％。结论成功构建了人B7一H3一RNAi的慢病毒载体，并建立了稳定感染的 低表达B7一H3基因的PaTu8988细胞株。 【关键词】胰腺肿瘤；B7．H3；RNA干扰；慢病毒感染 C