翻译-Ghost_peaks_with_notes.docxVIP

文稿边栏附注前言嗨，我是Ron Majors，安捷伦公司的资深科学家，和我一起给大家讲解的是Bill Champion ， HPLC技术支持部的一位化学家，现在我们继续LC故障排除系列讨论。现在我们将讨论鬼峰[show ghost puppet]。对于这类峰我们还有除“鬼峰”以外的其它几种叫法，如“伪峰”、“异常峰”、“假峰”等。所有这些术语都意味着色谱图中的这些峰没有准确反映样品的组成。鬼峰可能来自LC系统的污染，来自流动相的污染或来自样品的污染。我们将讨论如何识别其来源和如何纠正或补救它。Bill：我经常与这样的一些客户讨论，他们观察到一些色谱峰，并且他们认为这些峰不应该出现在色谱图上。确定其来源并消除这些伪峰极具挑战性，甚至有时是令人沮丧的。正如Ron所言，这些色谱峰可能来自于LC系统、流动相，或者样品制备。我们将按顺序依次讨论这些鬼峰的来源[editor: show topic titles on screen, underlined, as they are introduced]：先前进样的残留分析物被洗脱—该问题极易确认并解决。这是一个简单的色谱问题。流动相污染—该问题更令人困惑且更难于确认；但易于纠正。样品制备—该问题是隐伏性的并难于确认。它可能是一个化学问题。系统污染—对于现代仪器而言，它通常不是“鬼”峰的来源。但是我们也将简要讨论一些判断鬼峰是否来自于仪器的方法。色谱柱污染—色谱柱几乎永远不可能是“鬼”峰的来源，但是人们时常把其来源归咎于色谱柱。我们将简要讨论色谱柱的清洗方法。色谱柱污染是一个非常严重的问题；但是色谱柱污染更多的是影响柱压、峰形并可能影响样品的回收率。这些污染通常是由不干净的样品造成的。Ron Majors是一位安捷伦公司的资深科学家。Bill Champion是安捷伦HPLC色谱柱技术支持部的一位化学家。产生鬼峰的众多原因：先前进样残留分析物的洗脱流动相污染样品制备过程系统污染色谱柱污染先前进样残留物的洗脱Bill：这是一个进样分析氯苯那敏的例子。[insert phantom_peaks.gif]氯苯那敏是一种抗组胺药。我喜欢这个例子，因为它能很好地说明几个概念。马来酸氯苯那敏是由马来酸和氯苯那敏生成的盐。顺便说一句，当我们的样品是盐时，通常我们会观察到两个色谱峰，一个来自酸（此例中为马来酸），另一个来自碱（此例中为氯苯那敏）。在溶液中盐发生解离，酸性和碱性成分通常分别流过色谱柱。运行此分析的色谱人员最初认为她得到了一个氯苯那敏和马来酸同时被洗脱出来的峰。正如我之前所言，这是不太可能的。她随后又进了一针添加了伪麻黄碱的单样，得到右图所示的结果。[indicate with arrow]这非常令人困惑—她添加了一个单一组分，却得到两个额外色谱峰。Ron：[camera on ghost puppet only]其实是这样的：[camera to Ron]由于我们的分析是在pH11的碱性条件下运行的，所以我们得到的第一个色谱峰为离子化的马来酸，第二个色谱峰为伪麻黄碱，在仪器运行一段时间后，还观察到第三个色谱峰。第三个色谱峰实际上来自前一针进样的氯苯那敏。因为氯苯那敏的亲脂性比马来酸或伪麻黄碱更强（因此更容易保留到色谱柱上）并且因为前一针运行时间短（7 min），在第一次进样超过15 min后氯苯那敏也没有被洗脱出来。出现在下一张色谱图中的这种色谱峰往往被称作“迟滞”峰，因为该色谱峰是从前一针进样中延迟而来的。如果用户让色谱图运行大约20 min，那么就会得到第二个氯苯那敏的色谱峰了。在方法开发中，我们经常采用快速梯度洗脱—如在10或15 min内流动相由10%乙腈变到90%乙腈来大致了解样品中所含化合物的数量和它们的相对保留时间。我们将在另一个话题中讨论梯度洗脱。但是即使运用等度洗脱分离，我们也总是先采用洗脱力较强的流动相，如采用75%甲醇和/或较高流速以实现在更合理的时间里所有化合物均流出色谱柱。对于150 mm，5μm色谱柱而言，我们可以使用2 mL/min的流速。另一个判断是否“迟滞”峰的线索是，它一般比邻近的色谱峰要宽。[Insert phantom_peaks2.gif][editor: point out wide peak at right].在等度洗脱时，我们几乎从不会发现如图所示的，在如此靠近像伪麻黄碱色谱峰一样窄峰的地方有一个宽峰。由于理论塔板数和保留时间与峰宽比值的平方呈正比，所以如果计算出某色谱峰的理论塔板数异常的低，这意味着该峰可能为“迟滞”峰。[Insert column_efficiency.gif]或者更简单地说，峰宽应与保留时间呈正比。因此不正常的宽色谱峰可能就是迟滞峰。[insert column _efficiency_with_overlay.gi