棉花育种学..ppt

第二节 棉花生物技术育种 2.1 概述 植物组织、细胞培养技术应用于棉花，建立良好的棉花组织培养系统，将为 棉花基础理论问题的研究提供新的实验系统: 棉花细胞分化和胚胎发生的机理、基因表达和代谢调控等 解决棉花生产应用问题奠定可靠的基础，也为棉花遗传育种及生产开拓新的途径: 棉花的细胞工程和基因工程的遗传操作、抗性细胞系的筛选、人工种子的研制、种质资源的保存、杂种优势的利用等 2.2 组织培养技术2.2.1 愈伤组织的诱导和培养 在棉花组织的离体培养中，能否获得活力旺盛和易于分化的愈伤组织，是组织培养成功的关键。 诱导的愈伤组织可分为两类： 第一类：淡绿色或灰色，疏松而呈突出起伏，生长速度快，将这类愈伤组织放入水中，可自行散开成单细胞、小细胞团等。 细胞学观察表明第一类愈伤组织由皮层组织分裂而来，进一步培养产生胚状体，因此也称作为胚性愈伤组织。 胚性愈伤组织中IAA的代谢旺盛，IAA与ABA的比值较高，蛋白质和RNA的含量较高，Glu，Ala，Len等氨基酸的含量也显著地比非胚性愈伤组织的为高。 第二类：白色或深绿色，一般呈紧密坚实状，表面光滑，生长速度缓慢。 细胞学观察表明第二类则由中柱的组织细胞，即维管束及髓部细胞产生，即使经过多次继代培养及在较宽范围内变换培养基，其组织形态未变，未见有胚状体产生，这类愈伤组织属非胚性愈伤组织。 2.2.2 胚胎发生和萌发 球形胚、心形胚、鱼雷胚、子叶胚 2.2.3 再生苗的驯化移栽 试管苗5cm，3-4片真叶 2.2 组织培养的应用 人工种子的研制 细胞突变体的筛选 土壤盐渍化、 枯萎病和黄萎病 遗传转化 棉花组织培养技术已广泛地被用于农杆菌介导的遗传转化，以便把抗虫、抗除草剂等基因导入棉花品种 2.3 棉花基因工程 棉花基因工程起步晚，1987年首次获得抗卡那霉素的第一例转基因植株，但发展很快。 目前已涉及棉花育种的各个方面，如抗虫、抗病、抗除草剂、抗逆境，纤维品质改良、杂种优势利用等。特别是抗虫、抗除草剂方面达到了应用的水平。 转Bt基因抗虫棉是世界上第一例在生产上大面积成功栽种的转基因工程植株。 2.3.1 遗传转化方法 通过农杆菌转导基因 通过基因枪转导基因 花粉管通道法 （一）农杆菌介导法 原理 　 农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物和裸子植物的受伤部位(受伤处的细胞会分泌大量酚类化合物,从而使农杆菌移向这些细胞)，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中，并且可以通过减数分裂稳定的遗传给后代，这一特性成为农杆菌介导法植物转基因的理论基础。 　　科研人员将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。 第三节 棉花基因工程研究进展 一、抗虫基因工程 主要集中于： 苏芸金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因(Bt) 豇豆胰蛋白酶抑制基因(CPTI)。 作为一个抗虫新品系应具有以下特点： (1)保护作用具有连续性，可以控制任何时期内发生的害虫； (2)只杀取食害虫，对非危害生物无影响； (3)整个植株均可得到保护，包括化学药剂很难作用的部位，如叶下表面及根部； (4)抗虫物质只存于植物体内，不存在污染问题； (5)投资少。 （三）花粉管通道法 1 定义 在授粉后向子房注射合目的基因的DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。该方法于80年代初期由我国学者周光宇提出。 2 原理 花粉管通道法的主要原理是授粉后使外源 DNA 能沿着花粉管通道形成的途径渗透，经过珠心进入胚囊，最终转化尚不具备正常细胞壁的合子或早期胚胎细胞。 3.优点 不依赖组织培养人工再生植株 技术简单，不需要装备精良的实验室 常规育种工作者易于掌握 1．苏芸金杆菌杀虫晶体蛋白基因 作用机理： 苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)属于革兰氏阳性土壤杆菌，在芽孢形成的过程中，苏芸金杆菌可以产生大量的伴胞晶体，伴胞晶体由具有高度特性杀虫活性的结晶蛋白组成，这种蛋白通常被称为杀虫晶体蛋白(ICP)。 苏芸金杆菌的伴胞晶体随着昆虫的摄食进入昆虫的消化道，并释放出分子量为27—140KP的ICP。ICP通常以原毒素的形式存在，在昆虫幼虫的中肠道内，在蛋白酶的水解下，原毒素转型为毒性多肽分子，活化了