高效抗肝癌细胞的新城疫病毒株的筛选研究.pdf

292 2007年中国微生物学会学术年会 固相微萃取与气相色谱一质谱 联用鉴定分支杆菌的研究 黄利红 程冬娥察冬梅 曾照睿刘为邦 (武汉钢铁集团(公司)总医院，武汉，430080) 目的用固相微萃取与气相色谱一质谱联用鉴定分支杆菌。固相微萃取是一种简 单、快速、经济的新型无溶剂化样品前处理技术。 方法 以甲醇为衍生化试剂，在浓硫酸的催化作用下，直接在分支杆菌菌粉中把脂 肪酸转化为相应的脂肪酸甲酯，并用溶胶一凝胶BMA—OH—TSO复合涂层固相微萃 取探头对其进行顶空固相微萃取，用毛细管色谱一质谱联用技术对其进行分析。 结果对14种标准分支杆菌的细胞脂肪酸成分进行测定，通过对多次重复分析结 果进行比较，实现了不同分支杆菌的分类，并对临床分离的34株分支杆菌的细胞脂肪 酸的测定结果进行了分类，根据分析结果对其进行分类鉴定，并与传统的方法鉴定结果 进行了比较。结果表明，利用这种方法，对大部分临床分离株均可得到正确的分类鉴定 结果，但其中四株可能由于耐药性和变异的原因使其细胞脂肪酸组份发生了变化，未能 得到准确的鉴定结果。 讨论衍生化一固相微萃取与色一质联用技术在分支杆菌全细胞脂肪酸的测定以 及进行菌种鉴定的可能性及应用前景。为进一步提高这种方法对分支杆菌进行鉴定的 准备性，以便准备知道临床用药，各种药物及耐药性等对分支杆菌细胞脂肪酸的影响有 待详细系统地进行。 高效抗肝癌细胞的新城疫病毒株的筛选 樊晓晖杨建林宋德志赖振屏黄企光 (广西医科大学微免教研室，广西南宁，530021) disease 新城疫病毒(Newcastlevirus，NDV)属副粘病毒科Avulavirus属，为单股负链 RNA病毒，能感染多种人类肿瘤细胞且不依赖于肿瘤细胞增殖而独立复制，选择性杀伤 肿瘤细胞。已有的研究结果表明，不同毒力的NDV对肿瘤细胞的杀伤作用及效应不同． 2007年中国微生物学会学术年会 293 国外研究发现NDV溶瘤株(73一T、PV701及MTH一68／H等)较非溶瘤株抗肿瘤作用更 加强大而有效，而国内则大多对疫苗株LaSota等进行研究，尚未见NDV溶瘤毒株筛选工 作的文献报道。我们选择17株NDV进行抗肝癌细胞研究，期望能从中筛选到对肝癌细 胞有高效杀伤作用的新城疫病毒溶瘤株。为应用病毒治疗恶性肿瘤研究提供新的线索。 方法：选取ll株江西潘阳分离株NDV，5株广西分离株NDV(均由汕头大学流感中心鉴定 提供)及l株香港分离株NDV(香港大学分离鉴定提供)，接种鸡胚扩增病毒，48小时后收 取鸡胚尿囊液。血凝效价(HA)兰l：2048后，将标本保存于一80℃冰箱。常规方法培养3 常肝细胞(HL一7702细胞)，用M，I’I’法检测以上病毒对肝癌细胞的杀伤作用。初步筛选 出对肝癌细胞杀伤作用强的两株病毒，经过肿瘤细胞扩增传代后，用Vero—E6细胞连续 3次作蚀斑纯化，得到纯化病毒后再次鸡胚扩增，用纯化病毒对3株人传代肝癌细胞 TCIDSO检测病毒对细胞的杀伤效率。取筛选纯化的这两株NDV毒株进行下一步的分子 生物学实验。用RNA试剂盒提取病毒RNA后，逆转录合成eDNA。用针对F基因片段设 计的特异性引物，进行PCR反应扩增。将扩增产物与载体pGEM—T连接，转化到大肠杆 菌EPI一100中，用蓝白斑筛选实验和菌落PCR法挑选出阳性克隆，将测序结果与基因库 中国际标准NDV毒株的F基因同源性、疏水性、抗原表位等比较分析，绘制系统发育进化 树，确定这两株病毒的生物学特性。结果：1试验中17株NDV对3株人传代肝癌细胞 肝细胞(HL一7702细胞)作用小(两组数据有显著性差异，PO．05)。2试验所有NDV对 肿瘤细胞的细胞毒作用随病毒浓度提高而增强，与病毒作用细胞时间成正相关。3．筛选 出2株NDV(7793株、D817株)对肝癌细胞有较强杀伤性，感染肿瘤细胞72h后可引起 80％左右细胞死亡，但是对人正常肝细胞72h后杀伤率低于5％。4．NDV7793株与NDV D817株具有选择性在肝癌细胞中快速复制增殖的能力，是正常肝细胞中病毒生长的256 D817株和NDV —512倍。5．NDV 7793株体外抗肿瘤作用相比，