高活性秸秆降解菌群的构建及产酶条件优化研究.pdf

第 41卷 第 1期 河南师范大学学报 (自然科学版) Vo1．41 No．1 2O13年 1月 JournalofHenanNormalUniversity(NaturalScienceEdition) Jan．2013 文章编号 ：1000—2367(2013)01—0134—04 高活性秸秆降解菌群的构建及产酶条件优化 昌艳萍 ，耿 超 ，李春蕾 ，武瑞兰 ，薛柳青 ，李红权 (河北大学 a．生命科学学院；b．学基础医学院，河北 保定 071002) 摘 要 ：纤维素的开发与利用在当今资源紧缺的社会下是当务之急，秸秆含有大量的纤维素，木质素．它从一 个农业废弃物逐渐变为了再生资源开发的焦点．为了将秸秆资源充分利用起来 ，我们 以牛粪，羊粪及含腐烂树叶土 壤的混合物为材料，利用限制性培养技术，对其中能够降解纤维素的微生物进行驯化培养，并得到一组高效降解纤 维素的菌群．利用 CMC糖化力法和滤纸酶法测定该菌群 的纤维素降解能力．对菌群进行菌种的分离，并进行生理生 化试验分析各个菌株 的特性．通过正交试验对该菌群的最佳产酶条件进行优化．得到的菌群 CMCase酶活的高达 80U／mL，滤纸酶活高达 152U／mL．得到的最佳产酶条件为蛋 白胨纤维素培养基 以滤纸为碳源 ，pH 5．0条件下 35 ℃静置培养．筛选性能稳定的高产秸秆降解菌群 ，为充分利用秸秆等农业废弃物提供 了新 的方 向． 关键词 ：纤维素降解菌；CMCase酶活；滤纸酶活；生理生化；正交设计 中图分类号：Q939 文献标志码 ：A 秸秆是世界上最丰富的纤维素类物质之一 ，植物光合作用的产物有一半以上存在于秸秆 中．我 国是农业 大国，秸秆资源极其丰富，年产量可约达 7亿 t．在 自然状态下，纤维素与半纤维素、木质素等结合形成难 以分 解的 “木质纤维素”，纯培养微生物对其分解无能为力 ，而用物理方法则利用不完全 ，产生浪费现象，化学方法 成本高并且会对环境造成一定污染 ，所以利用多种微生物的协同关系来降解秸秆转化成单糖非常重要． 然而由于人们的认识不足，秸秆未经任何处理直接用于肥料 、燃料和饲料等的传统应用模式 ，正制约 着秸秆利用率、转化率和经济效益的进一步提高[1]，造成资源的严重浪费并且对环境产生一定的危害 ，如何 利用秸秆降解菌群将这些秸秆纤维素废弃物大规模地转化为简单糖类或蛋 白质等产品，进一步转化为酒精 、 饲料等已成为全世界研究的热点，也是缓解当今世界所面临的粮食短缺、饲料资源紧张、能源危机和环境污 染等问题的有效途经之一．利用土壤中的秸秆降解菌群 ，反应条件温和、资源丰富、成本低 、对环境无污染 ，可 谓一举多得．筛选性能稳定的高产秸秆降解菌群 ，研究其对未处理 的天然纤维素的降解作用对解决上述这些 问题至关重要． 1 材料与方法 1．1 实验材料 菌种来源 ：牛粪 、羊粪 、鸡粪混合腐烂枝叶的土壤发酵一星期得到．对秸秆进行碱化预处理 ：将秸秆剪成 1厘米左右的小段，加氢氧化钠 ，再放入无离子水中浸泡 60min，取出秸秆，控掉残余的水分，密封于塑料袋 中4d．，洗至中性 ，风干L2． 1．2 实验方法 1．2．1 菌种的选育 取准备好的土样制成土壤悬浊液 ，以 10 的接种量将土壤悬浊液加入到灭菌的蛋 白 胨纤维素培养液 (PCS，成分 ：秸秆 0．5g，蛋 白胨 0．5g，NaCL0．5g，CaCO。0．2g，酵母浸膏 0．3g，溶解于 100mL水中，pH 自然)中．为 了更好地观察菌种生长情况 ，向试管 中也要加入适量 的滤纸条 (12cm × 1cm)．将其放人恒温箱中培养一周左右，当观察到试管中滤纸崩解明显时则准备对菌群进行富集培养． 收稿 日期 ：2012—09—10 项 目基金 ：河北省人力资源与社会保障厅引进 留学人员资助项 目 作者简介 ：昌艳萍 (1969--)，女 ，湖北仙桃人 ，河北大学副教授 ，主要从事生物技术的研究 第 1期 昌艳萍等 ：高活性秸秆降解菌群 的构建及产酶条件优化 135 1．2．2 菌种的驯化与富集 选 出滤纸崩解 明显的试管 ，吸取菌液以 1O 的接种量加入到灭菌的上述试管 中培养 ]，观察滤纸条