第二章 植物组织培养的基本技术-xuigai.pptVIP

第一章 鲜切花组织培养的基本技术;第一节 实验室结构、仪器设备及操作技术 第二节 培养基的组成、配制与灭菌 第三节 植物离体培养体系的建立;一、植物组织培养实验室的结构及设计要求： 准备室; 无菌操作室; 培养室; 温室； 细胞学实验室;（一）准备室： 1. 主要功能：用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。;百分之一天平;各种型号的高压灭菌锅;超净工作台;（三）培养室： 1、功能：主要用于植物材料的培养。要求室内洁净并能保持一定的温度、光照以及湿度以适合植物材料的生长和分化。;培养架;光照培养箱;恒温振荡器;（四）细胞学实验室： 1、功能：主要用于培养材料的显微观察及照相等。;体视显微镜;二、实验室基本操作： （一）洗涤： 1、普通器皿：采用洗衣粉、洗洁精等中性洗涤剂洗涤。 2、难清洗器皿及移液管等：用水清洗后再用重铬酸钾洗液浸泡，最后清水冲洗，或用超声波仪清洗。 ;（二）灭菌： 1、器具灭菌：培养皿、解剖刀、镊子等用品。 （1）干热灭菌：铝箔包好后，放于恒温干燥箱内，150 ℃保温2小时，成本较高。 （2）高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌锅内120 ℃ 15-20min 。 （3）灼烧灭菌：接种时，解剖刀及镊子等浸入95％乙醇，然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。 ;;（三）无菌操作： 1、保持接种室的无污染环境，定期熏蒸或喷雾处理，进行消毒。接种前打开超净工作台及紫外灯照射20-30min，关闭紫外等灯后使气体散出后开始操作。 2、保持超净工作台的洁净：接种前用70％乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾，操作前，将手和手臂用70％乙醇消毒，所需试验用品用乙醇擦拭后放入超净工作台。;3、点燃酒精灯，进行操作，接种材料前后，灼烧瓶口，工具要灼烧彻底，防止交叉污染。 4、保持接种室的洁净，发现污染及时挑出，并在灭菌后清洗，以减少污染源。 5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽，出入接种室换拖鞋以保持接种室的洁净。 ; 第二节 培养基的组成、配制与灭菌;一、培养基的组成和作用 培养基（medium）是植物组织培养的重要材料，是外植体生长的营养物质，只有配制出适宜的培养基，才能使组织培养获得成功。 通常植物组织培养所用培养基包括以下六大类成分，即矿质营养、有机成分、植物生长调节剂、碳源、琼脂以及其他附加物等。 培养基的主要指标是营养成分及植物生长调节物质的浓度。; 培养基成分; 碳源 碳源主要为细胞提供合成新化合物的骨架，为细胞的呼吸代谢提供底物与能源，此外还能维持一定的渗透压。 常用的碳源主要是蔗糖，使用浓度在10-50g/L，此外果糖、葡萄糖、麦芽糖、山梨糖、甘露糖及可溶性淀粉等也常用于植物组织培养。 但在胚培养时采用40-150g/L的高浓度，因蔗糖对胚状体的发育起重要作用 糖浓度高低直接影响形态建成。;无 机 盐 ;种类： VB1 （盐酸硫胺素 ）、 VB6（ 盐酸吡哆醇 ）、 Vpp（ 烟酸 ）、Vc(抗坏血酸 ） 浓度：0.1-1.0mg/L　 作用： VB1　　　促愈伤组织产生，提高活力 　　　 VB6 　　　促根生长　 　　　 Vpp　　　与代谢和胚发育有关 　　 　Vc　　　　防组织褐变;肌醇 (又叫环己六醇） 能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。 使用浓度一般为50～lOOmg／L;氨基酸(almino acide) 培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用，用量在1-3mg／L之间。有时应用水解乳蛋白或水解酪蛋白，用量在10～1000mg／L之间。由于它们营养丰富，极易引起污染。;1、生长素类(auxin) （1）IAA(吲哚乙酸) 是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小，高温高压易被破坏，也易被细胞中的1AA分解酶降解，受光也易分解。 （2）NAA(萘乙酸)在组织培养中的起动能力要比IAA高出3～4倍，耐高温高压，不易被分解破坏，所以应用较普遍。NAA和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。 （3）IBA(吲哚丁酸)是促进发根能力较强的生长调节物质。 （4）2,4-D(2,4-2氯苯氧乙酸)起动能力比IAA高10倍，特别在促进愈伤组织的形成上活力最高，但它强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量常有毒效应。;2、细胞分裂素类 ( cytokinin ) （1）6-BA(6-苄基氨基嘌呤）应用广，人工合成。 （2）Zt (zeatin 玉米素)是一种活性最大的天然细胞分裂素