采用ｐＨ控制和Ｃａ〈’２＋〉添加来发酵高产Ｌ－谷氨酸氧化酶研究.pdf

采用pH控制和Ca2-添加来发酵高产L-谷氨酸氧化酶 方庆华 李青山 诸剑晌 钟建江 ‘ (华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室 上海 200237) 摘要 研究了在5L自动控制雄中叫 对灰色桩霉菌(Streptomyces)生产L-谷氛竣取化踌 (GIUOX)的影响.在pH6.2.6.7,7.0和7.3条件P-,菌产*-I分别为2.8.4.2.6.0和5.3IU/ml.随 着pH从6.2上升至7.0，与平板上观察到的相月户菌体生长受到抑制.在自动拉钊雄中，考察了 Ca对Gluox产圣的影响.在pH6.2和7.0条件gIhCa的加入没有明显改变峰的产食.在pH6.7 条件下，加入Ca-(60mM)*阵产贵提高了L540(9.3IU/ml)，为目前报道的最高值.当在培莽基 中加入60MMCa时‘，菌体生禅受到抑制.同时摘体形态发生了明显的改变.在未加入Ca=时‘， 菌体大多呈菌丝球状，而加入甲十后菌体主要以苗丝体存在· 关健词.4氮雌旅化阵件体发踌pH扫俐 Cal`灰色桩霉茸 菌热形态 1引言 L-谷氨酸氧化酶(Glu0x) L-谷氨 产生N2的酶。它被用来测定L-谷氨酸或 制成测定L-谷氮酸的生物传 可用于发醉 品工业中的戒份分析。在临床医学中，它可 用于谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氮 (GPT)和 等多种生物活性物质的分析测定。同其它酶 黯 中对谷氨酸的在线测定和在食品或药品中对 联合使用后，L一谷氦酸氧化酶也可 于动物细 天冬氨酸及天冬酞胺的珊倒乡代·是，至今关于划人不同来源中分离、纯化和生产GluOx的报道 电 还较少钟，。 『一; 灰色链橄菌，(Streptomye2 N1}是亦十恤d,m;-tIs.a6r,二株胞外高产G1uOx的菌种u1。在 ss{.NJ)是在土。，。选获得的- 摇瓶液体发酵时酶产量很低，发叫过程中培养基洲值同时明显降佣E+，这暗示培养基pH的控制可 能影响灰色链哥菌发醉生产G1u0咔 Ca`’作为胞外信号、信使、雄 器井同时是绝些微生物结构组成部分，为微生物生长所不可 咋 trichurtrifolii)抱子萌发、一些放 缺少的物质isio有文献报道Ca`+对 叶草状刺盘菌(Colleto 物 earothermophilius)菌体形态有明显影响 线菌气生菌丝形成和嗜热脂肪芽 杆菌(Bacillusst i,7)。在酿酒酵母(Saccharomyceiscerevisiae)、贝酵母(S bayanus)和最大克鲁维氏酵母 .75-2.0mM)可提高乙醇产量B][。 (1(1uyveromycesmaximum)培养基冲添加Ca,*(0 本文报道在5L自动控制反应a中pH和Cat对灰色链霉菌生长和胞外G1u0、生产的影响，同 时我们将描述添加Ca后菌体形辫的变化。 2材料和方法 2.1菌种’L.vI 2.2主要试剂 辣根过氧化物酶(华美生物卫程公司)，4-氨基安替毗琳(天津市化学试剂三厂)。 2.3 培养基 2.3 1种子培养基(%) 数皮抽提液5，琼脂1.5一2，玉米浆0.05。起始州 6.70 2.3 2发酵培养基(%) 葡萄糖3,硫酸钱0.6,氯化镁0.11氯化钾0.1，玉米浆0.9，磷酸_ 3场 氢钠0.09，反应器为5L全自控发酵罐(B.Braun). 2.4种子制备 斜面试管接种后，于28℃、98%湿度下培养6天，用作发酵罐种子(接入抱子数为1了)。 2.5液体培养条件 5L发酵罐中加入3L培养基，培养条件为28C，通气量2vvm,搅拌转速为400-1000r/min 以保证溶氧大于1096，并用1NMOB控制发酵液pH值。发酵30h后，加入补料培养基200ml(40g 葡萄糖，4g硫酸胺，4g玉米浆)。 2.6细胞生长的测定 从发酵罐中