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四种作用于钠通道的蜘蛛毒素的结构与功能研讨.pdf 209页

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湖南师范大学 博士学位论文 四种作用于钠通道的蜘蛛毒素的结构与功能研究 姓名:王美迟 申请学位级别:博士 专业:生物化学与分子生物学 指导教师:梁宋平 20081101 中文摘要 1.敬钊缨毛蛛是2001年在我国海南省乐东县发现的捕鸟蛛科新 种,结合阳离子交换和反相高效液相色谱技术,我们从粗毒中分离 到两种新的多肽。对其测序并分别命名为敬钊缨毛蛛毒素一II JZTX-II由32个氨基酸残基组成,选择性作用于大鼠心肌细胞,延缓 uM。 其河豚毒素不敏感(TTX-R)钠通道的失活,I岛为0.26±0.09 虽然对大鼠DRG牢O经元上TTX—R型钠通道没有影响,但对其河豚毒素 敏感(TTX-S)型钠通道有延缓失活的活性并伴有微弱的抑制峰电流 Il 活性,其IC卯为0.83±0.15M。JZTX-II还有延缓昆虫神经元TTX—S 钠通道失活的活性,其IC∞=I.9±0.07|lM。对于大鼠海马神经元 的序列一致性外,JZTX—II与所有已知的多肽毒素序列同源性都低, 由34个氨基酸残基组成,其C末端被酰胺化,是一个比较少见的酸性 多肽。电生理活性实验表明JZTX—IV能抑制大鼠背根神经节(DRG) 神经元TTX-S钠通道的失活,伴有弱的抑制峰电流的活性,其 IC。o=I.77±O.29uM,JZTX—IV还使稳态激活曲线往去极化方向漂移, 钠通道不敏感,但有明显抑制心肌细胞TTX-R钠通道的作用,其 p IC∞=O.90±O.17 M,而且使稳态失活曲线往超极化方向漂移,不同 于经典的位点3毒素。研究表明JZTX—IV对海马神经元钠通道没有表 现活性。 2.HWTX—I是虎纹粗毒中含量最高的毒素,一种突触前N一型钙离 子通道抑制剂。实验证明HwTX—I对大鼠DRG神经元N.型钙通道和 性。同时,HWTX-I是第一个在虎纹捕鸟蛛粗毒中被发现的类似于 uO-conotoxins MrVIA和MrVIB的跨通道活性多肽。我们从头化学 合成了HWTX-I,复性后的HWTX—I通过质谱、反相色谱和电生理活性 实验鉴定表明合成HWTX—I具有与天然HWTX-I完全相同的性质和功 能。结果表明合成的HWTX—I能完全抑制蜚蠊背侧不成对中间(DUM) 神经元和大鼠海马神经元钠电流,半有效浓度分别为4.58+0.58nM DRG、海马、蜚蠊DUM神经元的稳态激活和稳态失活曲线均没有影响。 3.海南捕鸟蛛毒液中分离到海南捕鸟蛛毒素一VII(矾TX—VII) 组成,HNTX-VII由33个氨基酸残基组成。电生理学实验结果显示 制大鼠海马神经元的TTX.S钠通道和蜚蠊DUM神经元的TTX.S钠 曲线和失活曲线没有明显影响,但可使大鼠海马神经元TTX.S钠通 道激活曲线往去极化方向漂移10mV,失活曲线往超极化方向漂移 ll 13.4mV。HNTX.ⅥI对不同钠通道亚型动力学有不同影响,也许是一 个很好的研究钠通道动力学的工具分子。研究同时表明HNTX.VII 是一种强的昆虫钾通道抑制剂,其IC50为13.74-1.2nM。 关键词: 蜘蛛毒素,钠通道,膜片钳 III ABSTRACT wasfoundin county,Hainan 1.Chilobrachysjingzhao Ledong twonovel

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