固定化肠膜状明串珠菌生产右旋糖酐的研讨.pdf

发酵工程学科的进展 ——第四次全国发酵工程擘术讨语套语文集 固定化肠膜状明串珠菌生产右旋糖酐的研究 王治业1，刘晓风2，魏甲乾1，景昶年3。周剑平“2 (1．甘肃省科学院生物研究所，甘肃兰州730000) (2．兰州理工太学生命科学与工程学院，甘肃兰耕730000) (3．甘肃省酒泉制药厂，甘肃酒泉?35000) raesenter- 摘要：本文以聚乙烯醇(PVA)为载体固定化肠膜状职串珠茁Lm(Leuconostc 茁较传统Lml226茁发酵生产右旋糖酐具有发酵周期短、产酐率高、可连续生产的特点。为 降低右菔糖酐生产成丰，实现右旋糖酐原料荮的连续化生产提供了可能。 关键词；固定化I肠膜状明串珠苗l右旋糖酐 右旋糖酐01是一种经微生物发酵产生的多糖，它作为一种抗休克和改善微循环的药 物已在临床普遍应用，是目前公认的优良代血浆首选药物，同时还可作为添加剂广泛应 用于轻工、食品、化工等领域。我国目前右旋糖酐生产工艺是将蔗糖经肠膜状明串珠菌 淀、过滤、干燥等工序，形成不同分子量大小的右旋糖酐产品。由于采用传统间歇式单罐 发酵，限制了单条生产线连续作业能力，产品成本较高。因而，若能通过生物工程新技术 来实现连续化生产右旋糖酐，可大大提高产率，降低成本。为此，利用细胞固定化技术， 对肠膜状明串珠茵Lml226固定化并对固定化后的产右旋糖酐性能进行了进一步的研 究。 1材料和方法 I．1菌种和培养基 1．1．1肠膜状明串珠菌Lml226(Leuconortc 国医药科学院血液研究所提供。 1．1．2培养基 活化培养基r3]： 0．20％ 庶糖10％ Na2HPO．·12H20 0．015％ 蛋白胨0．2％ MgSO。·7H20 Mn+3PPm7．o一7．2 pH 琼脂2％。 发酵培养基： 庶糖 12％ 作者简介：王治业<1976一)。男，工程师，甘肃张接人． 第四状全国发酵工程学术讨论会 蛋白胨0．075％ 7．2—7．4。 Na2HPq·12H。O0．1％pH 固定化Lml226菌增殖培养基： 庶糖10％ Na。HPO．·12HzO0．20％ 蛋白胨0．2％ H200．015％ MgS04·7 Mn+3PPm7．0—7．2． pH 1．2试验材料 1．2．1PvA凝胶：由甘肃省科学院生物研究所提供。 1．2．2试验用庶糖等原辅料：由甘肃酒泉制药厂提供。 1．2．3测定用试剂：均为A·R级。 1．3方法 1．3．1固定化细胞制备“]：将Lml226菌接种到活化培养基中增殖培养，取其离心菌液 按10％比例加入复合PVA凝胶溶液中搅拌均匀，低温处理成型后切块备用，外部尺寸 为：L×W×H=8ramx8ram×8ram。 为固定化增殖Lml226菌。 6％比例加入发酵培养基内，起始pH7．2，恒温24．5℃发酵。24hr后发酵完毕，倒去发酵 成熟液，加入新的培养基继续发酵，依次类推。发酵各阶段，每隔2小时，测定以下参数 变化，、粗右旋糖酐含量、菌数。 养基内。进行对照试验，其它条件同1．3．3。 乙醇令其充分沉淀，用手捏净吸附的乙醇后，用精度为0．019的天平称其湿重即为100ml 发酵液中的粗右旋糖酐含量。 1．3．6pH测定：酸度计直接测定。 1．3．7菌数测定：血球计数器法口]。 2结果与讨论 2．1 固定化Lml226菌产右旋糖酐能力 根据传统发酵使用游离Lml226菌逸一工艺。本试验按不同发酵时间在6、8、10、 变