固定化臭味假单孢菌体酶反应特征的研讨.pdf

固定化臭味假单孢菌体酶反应特征的研究 郑之明∗ （中国科学院离子束生物工程重点实验室，合肥，230031 ） 摘 要 将臭味假单孢菌（Pseudomonas putida ）细胞包埋在聚丙烯酰胺凝胶格子中，使其固定化。利用固 定化菌体的L-精氨酸脱亚氨基酶的活性，将L-精氨酸转化为L-瓜氨酸。固定化菌体最适转化反应温度为55ºC, 高于游离菌体；游离菌体和固定化菌体酶转化反应的最适PH值相同，均为5.6-6.0之间。菌体经固定化处理 后，热稳定性和PH值稳定性均有提高；将固定化菌体悬浮在底物缓冲液中，能够使固定化菌体酶活性提高， 即底物激活酶活性。在实验室通过固定化菌体进行精氨酸到瓜氨酸的转化反应，转化率90%左右，几乎无 副产品产生。 关键词 固定化细胞 L-精氨酸 L-瓜氨酸 臭味假单胞菌 THE CHARACTERISTICS OF ENZYME REACTION OF IMMOBILIZED PSEUDOMONAS PUTIDA CELLS ZHENG Zhiming (Key Laboratory Of Ion Beam Bioengineering,The Chinese Academy Of Sciences,Hefei,china, 230031) Abstract The microbial cells of Pseudomonas putida were immobilized by entrapment in a polyacrylamide gel lattice. Enzymatic properties of L-arginine deiminase of the immobilized P. putida cells were investigated and compared with those of the intact cells. The heat stability and PH stability of the enzyme were increased by immobilization of the cells.The optimal temperature for the formation of L-citrulline was 37°C for the intact cells and 55°C for the immobilized cells. when an aqueous solution of 0.5M L-arginine hydrochloride (pH 6.0) was used ,the immobilized cells converted L-arginine to L-citrulline about 90%. Key words immobilized cell, L-citrulline, L-arginine, Pseudomonas putida 引 言 L一瓜氨酸(L- citrulline)，是一种在文献上很少见报道的非蛋白质氨基酸。近年来国外 的众多研究表明，L一瓜氨酸具有很多重要的生理功能，如清除自由基，异体排斥效应指 示剂，血管舒张作用，稳定血压以及治疗风湿关节炎，抗氧化等，应用前景十分广阔[1] 。利 用含有高活性的L-精氨酸脱亚氨酶的臭味假单孢菌（Pseudomonas putida ）菌株，将L-精氨 [2] 酸盐酸盐转化为L-瓜氨酸，专一性强，产品浓度高，提取工艺简便，适合于工业化生产 。 本文对聚丙烯酰胺凝胶包埋菌体的酶反应特征进行了研究，并对固定化菌体生产L-cit过程进 行了摸索实验。 1 材料和方法 1.1 菌种 臭味假单孢菌ATCC4359 1.2 试剂 L-精氨酸盐酸盐、L-瓜氨酸购自于日本味之素公司，其它如丙烯酰胺、BIS 、DMAPN 、 ∗作者通讯地址：E-mail:zmzheng92@,Tel:0551-5593145 过硫酸钾等均为市售化学品 1.3 斜面传代培养条件 蛋白胨 1% ，牛肉膏 0.5% ，酵母膏 0.5% ，NaCl 0.25