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小鼠Mater基因选择性剪接变异体的鉴定和分析研究.pdf 62页

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摘要 摘 要 程慧 (分子遗传学专业) 指导老师:马润林 真核生物mRNA的选择性剪接现象(Alternativesplicing)是指由单个基因 (Singlegene)产生多种转录本 (MultiplemRNAtranscripts)的转录加Z机制, 对扩大所转录蛋白的结构和功能多样性起着非常重要的作用。选择性剪接在高等 动植物中普遍存在,可以认为是进化过程中生物对环境压力在遗传信息上的一种 适应性策略。作为与自免疫性卵巢退化疾病相关的一个卵母细胞特异自身抗原基 因,位于小鼠第7号常染色体的Mater(丛aternalAntigen皿atEmbryosRequire) 与小鼠早期胚胎发育密切相关。己发表的研究工作对自免疫性卵巢退化抗性小鼠 C57BL/6J(简称B6)和易感性小鼠A/J的Mate:基因的选择性剪接变异体有过 一定的报道,发现了A,B,C和D四种变异体。本研究主要对一组新的抗性 (CBA/J)和易感性 ((SWR/J)小鼠近交品系的Mate:基因进行了深入探讨,并 对本实验室己有的B6和A/J小鼠的mRNA的测序数据加以分析,期望证实并寻 找新的选择性剪接变异体。根据对mRNA克隆、筛选、测序和分析的结果,共 发现了MatermRNA的五种剪接变异体,分别命名为B,E,F,G和H。其中B 与己报道的结果吻合,E,F,G,H为本研究所发现的新的剪接变异体,其选择 性剪接位点都位于阅读框内。B变异体编码1111个预期氨基酸,E,F,G和H 分别编码1095,727,1085和989个预期氨基酸。B变异体具有MatermRNA的 全部已知外显子,E变异体缺失了外显子6,F变异体保留了部分内含子8并且 缺失了外显子10,G变异体缺失了部分外显子14,H缺失了部分外显子13,它 们所有的内含子与外显子结合处的DNA序列都遵循 “GT-AG"剪接规则。基于 现有的研究结果,B在B6,A/J,CBA/J和SWR/J四种小鼠品系中均存在,E存 在于CBA/J和SWR/J,F存在于B6和CBA/J,G仅存在于CBA/J,H仅存在于 A/J。利用剪接变异体特异性引物的RT-PCR分析结果表明,B,E,F,G四种 剪接变异体都是卵巢中稳定的转录产物,B是主要存在的剪接形式,E,F,G相 对来说表达水平较低。本论文根据B,E,F,G四种剪接变异体的cDNA序列 推导得到了对应预期蛋白异形体的氨基酸序列,并对这些蛋白产物的可能的功能 进行了预测,进一步鉴定和描述这些蛋白产物将对认识它们的功能有重大意义。 关键词二Mater,选择性剪接,自免疫性卵巢退化,RT-PCR 小鼠Mate;基因选择性剪接变异体的鉴定和分析 Abstract ChengHui(MajorinMolecularGenetics) DirectedbyProfessorRunlinZMa,Ph.D. AlternativesplicingofmRNAineukaryotesisatranscriptionalprocessthat allowsanalteredormultipletranscriptionalspeciestobegeneratedfromasinglegene, eachencodingforastructurallyorfunctionallydifferentproteinspecies.Itisexisted asamechanismthatplaysanimportantroleinexpandingproteindiversityfor structureandfunctionvariation.Alternativesplicingisconunoninhigheranimalsand plants,andisconsideredasanadaptivestrategyingeneticinformationto environmentalpressureduringthecourseofevolution.Asanoocyte-specific autoantige

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