小鼠子宫珠蛋白结合蛋白真核表达载体构建及其在COS-1细胞的表达研究.pdf

国际 理科 与 ‘ 杂志 2ol3 Int，Path0fCIinMed … ，33(1) http：／／w…w…g‘jb～1_n…et’ 16 DOI：10．3969／j．issn．1673-2588．2013．01．003 · 论 著 · http：／／www．gjb1．net／gjblkx／fileup／PDFpdf 小鼠子宫珠蛋白结合蛋白真核表达载体构建 及其在 COS一1细胞的表达 李晨 ，史小娟 ，黄艳红 ，冯丹丹 ，许建平 ，罗 自强 (1．中南大学湘雅医学院生理学系 ，长沙 410078；2．长治医学院生理学教研室 ，山西 长治 046000) 摘【 要】 目的：构建小鼠子宫珠蛋白结合蛋白(mouseuteroglobinbindingprotein，mUGBP)真核表达载体， 观察其在 COS一1细胞中的表达和定位。方法 ：用 RT．PCR方法扩增 mUGBP的eDNA序列，将其 插入pEGFP—N1载体的多克隆位点构建 pEGFP．UGBP重组质粒。采用脂质体转染法将重组质粒转 染到无内源性mUGBP表达的非洲绿猴肾成纤维细胞株COS．1中，观察其在细胞内的表达，并用 Western免疫印迹方法进行验证。结果：pEGFP—UGBP重组质粒经酶切鉴定 以及测序证实，插入 的 目的基 因序列完全正确 。激光共聚焦显微镜观察发现，转染了pEGFP．UGBP重组质粒的细胞株 可见绿色萤光蛋 白的表达；Western免疫印迹检测发现细胞膜组分中可检获上述转染了重组质粒的 细胞所表达的融合蛋 白。结论 ：成功构建了pEGFP．UGBP重组质粒并进行了真核表达。 [关键词 】 子宫珠蛋 白；真核表达载体 ；基因表达；小 鼠 C—_onst·ruct一I●onOt·moUSeut·erOI21I■ob■i·n b0l●nd●l●n2prot·ein‘eUk■an，otJI●C expressionvectoranditsxe pressioninCOS-Icells LIChen2JSHIXiaojuanJHUANGYanhong，FENGDandanJXUJianping，LUOZiqiang ． DepartmentofPhysiology,XiargyaSchoolofMedicin6C_znfmlSouthUnborn,Changsha410078； ZDeparfmmtofPhysiolo~al哪 CD al f c}l删 Abstract Objective：Toconstructaeukaryoticvectorofmouseuteroglobinbindingprotein(mUGBP)andtodetectits expressionandlocalizationinCOS一1cells．Methods：ThecDNAsequencesofmUGBPwereamplifiedbyRT- PCR,andthentheywereclonedintothepEGFP—N1vectortoconstructanew recombinantplasmidpEGFP· UGBE TherecombinantplasmidwassubsequentlytransfectedintoCOS-lcellswithliposometransfection reagent．TheexpressionandlocalizationofthemUGBP—GFPfusionproteinwereanalyzedbyconfocalmicrosco