向小鼠导入人类MCP和CD59基因的整合和表达研讨.pdfVIP

--一卫丝一 — 向小鼠导入人类MCP和CD59基因的整合和表达研究 研究生:李聚学 导师:曹斌云 合作导师:魏庆信 摘要 本研究在探索了提高小鼠超数排卵效果的基础上，利用显微原核注射技术 将hMCP和hCD59基因导入小鼠受精卵中，采用PCR和Southernblot对仔鼠 进行了外源基因的整合检测，并利用细胞毒实验对检测到的转基因阳性小鼠进 行了表达分析。结果如下: 1‘分析了激素剂量、激素注射间隔时间、发情周期、季节和温度对小鼠超 排效果的影响。当PMSG与hCG剂量为5-IOIU时，见栓小鼠平均获卵数差异不 显著(P0.05),激素剂量为15工U时，见栓小鼠平均获卵数显著下降(PO.0动; 激素注射间隔时间46h与48h见栓小鼠平均获卵数差异不显著(P0.05)，当激 素注射时间间隔为50h时，见栓小鼠平均获卵数显著下降(P0.05);在发情周 期不同阶段超排效果不同，发情前期开始超排，其见栓率、见栓小鼠平均获卵 数均显著高于其他情期(P(0.05);当环境温度维持在2015℃时，不同季节小 鼠超排效果无显著差异(PO.05);在冬季，鼠房温度为2012℃时，小鼠超排 见栓率和见栓小鼠平均获卵数均极显著高于环境温度为 10士2℃的超排效果 (P0.01)。 2 利用显微注射技术将hMCP和hCD59基因导入2153枚小鼠受精卵中，其 中可移胚为1725枚，移植到62只受体母鼠，其中有29只母鼠妊娠，妊娠率 为46.7%。在母鼠妊娠过程中，前后有 13只母鼠流产，流产母鼠解剖后，观 察发现子宫内有胚胎附着点存在。未流产的16只妊娠小鼠产仔71只，可移胚 的产仔率为4.1%(71/1725)0 3.本研究分析了导入有hMCP和hCD;，基因小鼠胚胎的移植数量和分别在左 侧或右侧输卵管胚胎移植对受体母鼠产仔率和妊娠率的影响，结果表明，移入 21-30枚注射胚数量组的产仔率和妊娠率均极显著高于移入10-20枚注射胚数 量的产仔率和妊娠率 (PO.01);移入21-30枚注射胚数量组的妊娠率与移入 摘要 31-45枚数量组的妊娠率相比，差异不显著 (P0.05):移入21-30枚注射胚 数量组的产仔率显著高于移入31-45枚组的产仔率 (P0.05):在受体小鼠左 侧或右侧输卵管移植胚胎的妊娠率和产仔率差异不显著 (P0.05)o 4.利用PCR和Southernblot对71只仔鼠进行了外源基因的整合检测，一共 检测到6只阳性小鼠，其中4只为hCD59基因阳性小鼠(活仔)，2只为hVCP基 因阳性小鼠(死胎)。外源基因整合率为8.5%(6/71)0 5利用细胞毒实验对4只hCD59基因阳性小鼠进行了表达分析，发现有3:只小 鼠淋巴细胞对混合人血清有不同程度的抗性，证明这 3只小鼠表达有人的CD59 分子，并且hCD59基因的表达产物能在一定程度上抑制超急性排斥反应。 关键词:转基因小鼠，超数排卵，胚胎移植，MCP,CD59,PCR，细胞毒实验 摘要 TheStudyonIntegrationandExpressionofhMCPand hCD59GenesMicroinjectedtomice Postgraduate:LIJuxue Supervisor:ProfCAOBingyun Co-supervisor:ProfWEIQingxin Abstract Onthebaseofimprovementofmousesuperovulation,hCD59geneandhMCP geneweremicroinjectedtomousezygoteinthisstudy.TheintegrationofhCD59 g