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家蝇幼虫cDNA文库的构建及初步鉴定研究.pdf 90页

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广东医学院 硕士学位论文 家蝇幼虫cDNA文库的构建及初步鉴定 姓名:金小宝 申请学位级别:硕士 专业:临床检验诊断学 指导教师:朱家勇 20040501 家蝇幼虫cDNA文库的构建及初步鉴定 摘 要 【目的】 构建家蝇幼虫cDNA文库,为家蝇抗菌肽基因的克隆和结构功能研究奠定基础。 【方法】 以大肠杆菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)免疫诱导24h后 的家蝇二龄幼虫为实验材料,从家蝇三龄幼虫脂肪体中提取完整的总RNA,运用 mechanismat5‘endofmRNA SMART(swi tching transcript)技术构建家蝇幼 引物,以文库为模板扩增出两基因的编码区序列,将所得序列克隆至tJpUCm.T载体 上,进行序列测定,并运用相关医学生物信息学专用软件对克隆的基因进行序列分 析。 【结果】 pfa/mI。从扩增文库随机挑取12个克隆进行PCR扩增鉴定,结果显示所选的12个噬 菌体克隆均含有重组的cDNA,插入片段大小为400bp~2500bp之间。 (identities)。ORF Finder分析,含4个可能的ORF,其中最大的ORF位于18 bp一299 质与家蝇成虫防御素氨基酸序列同源性达93%,理论蛋白质相对分子量为9974,pl Finder分析,含有2个可能的ORF, 基因Score值达373,一致性为96%(identities)。ORF 其中最大的ORF位于20 编码63个氨基酸。编码蛋白质与家蝇Cecropin—I氨基酸序列同源性达82%,与地中海 10.02。 【结论】 1.成功构建了家蝇幼虫cDNA文库并进行了初步鉴定,为寻找家蝇新的抗菌肽 基因奠定了良好的工作基础。 2.以文库为模板,分别特异扩增出家蝇Defcnsin和Cecropin基因的编码区序列, 对其进行了结构和功能预测,为这两个抗菌肽基因的表达及活性鉴定打下一定基 础。 关键词:家蝇 抗菌肽 防御素 天蚕素 cDNA文库牛物信息学 domestic ofMusca andidentification Construction cDNA larve library Abstract Muscadomestic canbe acDNA of larve,which Toconstruct library Objective structureand antibacterial and the for thenovel predicting used finding peptidegenes ofthe

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