小鼠骨髓细胞染色体标本制备.PPTVIP

实验九 小鼠骨髓 细胞染色体标本制备 一、实验目的 1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨 髓细胞染色体制片技术。 2、并对动物染色体进行观察。 二、实验原理 1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞的原始细胞，具有高度的分裂增殖能力。  2、适当浓度秋水仙素处理分裂增殖的骨髓细胞，能抑制细胞分裂时纺锤丝、纺锤体的形成，而染色体不分裂成为子染色体，使细胞不向后期过渡，从而收集到更多的中期分裂相。 同时秋水仙素作用能使染色体缩短、变粗。 三、实验材料、器具和药品： 1、材料： 小白鼠 2、器具： 注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。 3、药品： 0.01%秋水仙素、0.075MKCl、 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、 Giemsa染液、0.01M磷酸缓冲液 (PH6.8)，0.85%生理盐水。 四、实验步骤 1、预处理：实验前2.5-3小时，给小白鼠腹腔注射0.1% 秋水仙素0.1ml 。作用： 2、处死动物：断颈处死小白鼠，解剖小鼠内生殖器官，鉴别雌雄性别 3、取股骨：剥取股骨，剔去肌肉组织，剪去两端的股骨头。 4、取骨髓：注射器吸取0.6ml生理盐水, 针头插入股骨一端,反复冲洗骨髓到10ml的离心管中。 5、低渗：加入4.4ml的0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用 6、离心：离心之前加1ml固定液并用吸管轻轻吹匀，进行预固定； 1000rpm离心10分钟后，弃去上清液。 7、固定：沿管壁慢慢加入固定液5ml，用吸管吹打成细胞悬液后，室温下静置15分钟，5分钟时轻轻吹打，使细胞充分固定。 8、离心：1000rpm离心10分钟，弃上清液。 9、再固定：同固定I。 10、再离心：同8，离心后加0.1ml固定液，吸管吹打成细胞悬液。 11、滴片：用吸管吸取细胞悬液，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干。预冷载玻片的作用： 12、染色：10% Giemsa染液染色30分钟。 13、镜检：低倍———高倍 。 五、作业 1、选择染色体清晰，分散好的中期分裂相，计数染色体，显微摄影、并打印出照片。 2、分析成功或失败的原因。 * * 四倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=32） 二倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=16）