缬沙坦后处理对离体大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响.docVIP

精品论文 参考文献 缬沙坦后处理对离体大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响 徐宪连（山东省淄博市桓台县人民医院 山东淄博 256400） 【摘要】 目的 观察缬纱坦后处理对离体大鼠心肌缺血再灌注（ischemia-reperfusion, I/R）细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。方法 利用Langendorff 离体心脏灌流装置，采用完全复灌/停灌的方法制备I/R模型。24只SD大鼠随机等分为：①对照（sham）组：K-H液持续灌流110min；②I/R组：停灌30 min，复灌60 min；③缬纱坦后处理（Povst）组：I/R+缬沙坦1mu;mol/L（再灌注头15min给药）。Hoechst 荧光染色观察凋亡情况，计算凋亡指数（AI）；Western blot 检测Bcl-2、Bax的表达。结果 sham组凋亡细胞零星分布（AI=3.48plusmn;0.38），另两组均有大量凋亡细胞存在，且Povst组AI（25.87plusmn;1.04）明显低于I/R组（36.99plusmn;2.26）（Plt; 0.05）；Bcl-2、Bax的表达在I/R、Povst组均明显高于sham组（Plt; 0.01），Povst组Bcl-2的表达明显高于I/R组（Plt;0.01），而Bax的表达与I/R组无显著差异（Pgt; 0.05）。结论 缬纱坦后处理抑制离体大鼠心肌再灌注细胞的凋亡，与上调Bcl-2表达、增加Bcl-2/Bax 比值有关。 【关键词】缬纱坦后处理 Bcl-2 Bax 随着溶栓及PCI的广泛应用,心肌再灌注损伤越来越引起人们的重视，减轻甚至避免再灌注损伤已成为人们的研究热点。缺血后处理[1]是指心肌长时间缺血后、再灌注即刻给予的几次短暂再灌注/缺血刺激，它有效减轻再灌注损伤，且与抑制细胞凋亡有关。缬沙坦能抑制心肌细胞的凋亡[2]，而缬沙坦后处理对细胞凋亡的影响未见报道。本实验排除了神经、体液等因素，观察缬沙坦后处理对再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax 表达的直接影响，为药物后处理的应用提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 实验动物和分组 雄性SD大鼠24只, 随机等分为：①对照（sham）组：K-H液（NaCl 118, NaHCO3 25, KH2PO4 1.2, KCl 4.8, MgSO4 1.2, CaCl2 2.0, 葡萄糖11.0，单位mmol/L）持续灌注110 min;②缺血再灌注（I/R）组: 停灌30 min, 再灌60 min；③缬纱坦后处理（Povst）组：I/R+缬沙坦1mu;mol/L（再灌注头15min给药）。 1.2 模型的制备 麻醉起效后开胸、取心，悬挂Langendorff装置上，行主动脉逆行灌流（以95%O2+5%CO2饱和的KH液）。MedLab 生物信号采集处理系统(南京美易生物有限公司)显示、记录。采用完全复灌/停灌的方法复制I/R模型。 1.3 凋亡细胞形态的观察及凋亡指数的测定 取材、固定，制成石蜡切片行Hoechst 染色，Zeiss荧光显微镜（德国Carl Zeiss公司）下胞体变小、胞核致密浓染或呈碎块状致密浓染的明亮蓝色细胞即凋亡细胞。凋亡细胞占细胞总数的百分比为凋亡指数（apoptosis index, AI）。 1.4 Bcl-2、Bax的表达 取材、裂解、离心、取上清，BCA法测蛋白浓度。取样SDS电泳，转膜脱脂后加Bcl-2或Bax 抗体（1:200）；TBST洗膜，加NBT/BCIP（碧云天生物技术研究所）孵育显色。GENE GENIUS（美国sygene公司）分析各条带灰度，以GAPDH（1:1000）作内参，计算各灰度与内参灰度比值。 1.5 统计学处理? SPSS13.0分析处理，计量资料以均数plusmn;标准差（-xplusmn;s）表示，多组间差异用单因素方差分析，多组间两两比用?Tamhanersquo;s T2检验，以Plt; 0.05为差异有显著性。 2 结果 2.1 凋亡细胞形态及细胞AI 的变化 Hoechst 染色见sham组凋亡细胞零星分布（AI=3.48plusmn;0.3 8），另两组均有大量凋亡细胞存在，且Povst组AI（25.87plusmn; 1.04）明显低于I/R组（36.99plusmn;2.26）（Plt;0.05）（图1）。 图1