缬沙坦对心肌缺血再灌注模型心肌细胞凋亡的影响.docVIP

精品论文 参考文献 缬沙坦对心肌缺血再灌注模型心肌细胞凋亡的影响 王建 任继刚 (成都市第六人民医院心内科 四川成都 610000) 【摘要】目的 观察血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂缬沙坦对大鼠心肌缺血再灌注模型心肌细胞凋亡及相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法 SD大鼠随机分为三组：（1）假手术组（6只）；（2）缺血再灌注组（6只）：结扎左冠状动脉30min，再灌注24h；（3）缬沙坦组（6只）：手术前灌胃缬沙坦 (10mg/kg/d)4周后分别行缺血30min再灌注24h。采用缺口末端标记（TdT-mediated dUTP nick end labeling ，TUNEL）法检测心肌细胞凋亡，免疫组织化学方法检测心肌组织Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 缺血再灌注组心肌细胞凋亡数目增多（139.0plusmn;26.2），其Bcl-2和Bax蛋白阳性染色的细胞相应增多。缬沙坦组凋亡心肌细胞数量明显减少（102.4plusmn;12.7）、心肌组织中Bax蛋白表达低于缺血再灌注组（Plt;0.05）。结论 心肌缺血再灌注过程中大鼠心肌细胞发生凋亡，缬沙坦减少心肌细胞凋亡的数量，其抑制作用可能部分与下调Bax蛋白表达有关。 【关键词】 缬沙坦 再灌注损伤 细胞凋亡 【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）29-0055-02 近年来发现心肌局部存在一个独立的肾素血管紧张素系统，其主要介质血管紧张素II不仅影响血流动力学，对细胞的增殖与凋亡也具有调节作用，但其参与心肌缺血再灌注损伤的机制尚不清楚[1]。本研究观察缬沙坦对大鼠缺血再灌注模型心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响，以探讨其与心肌缺血再灌注损伤的关系。 材料与方法 1.实验动物与主要试剂：健康雄性SD大鼠，体重为220plusmn;50g。TUNEL试剂盒为Boehringer Mannheim公司，Bcl-2、Bax鼠单克隆抗体为Santa Cruz公司产品，免疫组化染色SP试剂盒购自北京中山公司。 2.大鼠心肌缺血再灌注模型制备及分组：SD大鼠戊巴比妥钠麻醉后，于左冠状动脉下2～3mm处穿线结扎左前降支，在结扎线中埋置松解线。18只大鼠随机分成：1、假手术组（6只），以生理盐水4mlmiddot;kg-1middot;d-1灌胃，1次/天，连续四周后行假手术，即冠状动脉下穿线不结扎，持续30min；2、心肌缺血再灌注组（6只），以上述方法生理盐水灌胃四周后，分别行心肌缺血30min，再灌注24h；3、缬沙坦组（6只），以缬沙坦10mgmiddot;kg-1middot;d-1溶于生理盐水中灌胃四周后，分别相应行心肌缺血30min，再灌注24h。 3.心肌组织石蜡切片：取左心室游离壁中部心室肌常规石蜡包埋，并作心脏横断切片（5um），分别作细胞凋亡染色和免疫组化SP染色光镜下观察细胞形态学变化。 4.TUNEL法检测心肌细胞凋亡：用光学显微镜times;400观察每个视野中凋亡细胞数目，每组随机数100个视野取其均值作为本组的代表值。 5.心肌组织Bax，Bcl-2免疫组织化学染色：心肌组织石蜡切片常规脱蜡至水，分别以Bcl-2、Bax鼠单克隆抗体为一抗进行免疫组织化学染色，方法参照SP试剂盒说明书。DAB显色，苏木素复染，封片镜检。光学显微镜下计数100个高倍视野中Bcl-2和Bax阳性心肌细胞数目，求其均值。 6.统计学处理：所有数据以均数plusmn;标准差（x-plusmn;s）表示，两组间均数比较采用t检验，Plt;0.05为差异有显著性，Plt;0.01为差异有高度显著性。采用SPSS10.0软件处理。 结果 1.HE染色光镜观察：各缺血再灌注组心肌细胞混浊肿胀，可见核浓缩，心肌纤维弯曲，缬沙坦组则明显减轻。 2.TUNEL法检测心肌细胞凋亡数：缺血再灌注组可见较多凋亡细胞，缬沙坦组明显减少，两组数据有显著统计学意义。假手术组未见凋亡阳性细胞。 表 各组大鼠每高倍视野（times;400）平均心肌细胞凋亡数 * 缺血再灌注组与缬沙坦组比较的P值 3.心肌组织中Bcl-2与Bax蛋白的表达：假手术组仅见极少数散在的Bcl-2蛋白阳性染色细胞；心肌缺血再灌注组Bax和Bcl-2蛋白的表达较假手术组明显增加（Plt;0.01）。缬沙坦组Bax蛋白阳性表达显著低于心肌缺血再灌注组（Plt;0.05），而其Bcl-2蛋白阳性表达指数未见明显变化。表明心肌细胞