灵芝子实体和菌丝体的提取物及其各纯化组份生物活性的比较研究.pdf

灵芝子实体和菌丝体的提取物 及其各纯化组份生物活性的比较妇 张劬松，贾薇，邢增涛，唐庆九，刘艳芳，杨焱，周昌艳，刘方 (上海市农业科学院食用菌研究所，上海农科院天然药用资源研究与开发中心， 上海市农业遗传育种重点开放试验室，农业部食用菌遗传育种重点开放试验室，上海，201106) 摘要：从不同品种的灵芝中筛选出了多糖古量最高的菌株GL2为材料，利用杜层析技术从子实 体和菌丝体提取物中分离得到多个组分。实验发现子实体组分P3，船1及P32对人白血病细胞株 免疫活性测试的结果显示子实体各组分在刺激小鼠脾淋巴细胞，T和B细胞的增殖，提高人外周 血中NK细胞杀伤活性方面比菌丝体的作用强：进1步的实验发现_了实体与茼蝗体相应组分在刺激 人外周血中的T和B淋巴细胞增殖方面的活性差异不大。子实体和菌丝体提取物各组份均可齐叮量 体各组份相当，在高浓度时要明显好于赤芝子实体提取物各组分。 关键词：灵芝，子实体，菌丝体，免疫活性，抗肿瘤 灵芝Gsnoderma 洲等国家掀起了研究灵芝的高潮，对灵芝的生物学、化学、药理及临床麻用等进行了深入的研究． 取得了很大的进展。目前．世界上已知灵芝约有120种，中国98种，野生种在我国大部分地区都 有分布(林志彬，2001)。灵芝的化学成分非常复杂，而且因所用菌种的不同、生产地域的不同、 栽培或培养基质的不同以及提取方法的不同而存在一定的差异(刘艳平等)。目前存灵芝中研究 较多的化学成分是多糖类和三萜类，而且普遍认为它们与灵芝的抗肿瘤功能有笑。近二十年来国 内外大量的研究结果证明灵芝具有广泛的药理作用，凡毒性极低，如己发现灵芝具有抗肿痛、免 疫调节、镇静安神、强心殷抗心肌缺血、调节血脂、平喘、保肝、降血糖、抗缺氧和清除自由基 以及延缓衰老等药理作用(林志彬，2001)，最近的一些实验还证明灵芝有抑制艾滋痫病毒增殖的 et 效果(E1一Mekkawy al，1998)。正因为灵芝有如此多功效，使灵芝成为研究最多和开发产品最 多的药用真菌之一。从我国的斧种灵芝子实体的产品质量来看，产品都存在稳定性的问题。人家 知道，灵芝的子实体的品质受许多因素的影响，比如培养用的木材的种类，生长的温度、湿度， 采收的时间·干燥的方式等因素，因此造成以子实体为原料生产出的灵芝产品质量不稳定性的后 果，冈此人f『J希望通过可人为控制的发酵过程来大量生产有生物活性的灵芝原料。据文献报道灵 ．29— 芝的菌丝体粗多糖也具是调节免疫和抑制肿瘤生长的生物活性(曹加等，1996；胡映辉等， 1999)，但其功效与相同菌种的子实体多糖的活性相比如何。则鲜有报道。如果菌丝体多糖的功效 与子实体多糖的相当或比其功效更好，则利用液体发酵来生产灵芝活性多糖以替代子实体多糖将 具有非常诱人的前景。本研究将对多糖含量最高的灵芝菌株赤芝GL2子实体与菌丝体的提取物及 分离纯化的各组份的生物活性进行比较研究，探讨以灵芝菌丝体替代子实体的可能性。 1材料与方法 1．1试剂与仪器 756紫外分光光度计(上海第三分析仪器厂)，超声波仪(FSl4，FISHER (Molecular Devices)。 3，5一二硝基水杨酸、NaCI、浓H。sO。、葡萄糖、亚硫酸钠、氢氧化钠、酒石酸钾钠均为国产 分析纯试剂；苯酚国产分析纯试剂重蒸馏后使用；单糖标准品(鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露 TNF—n试剂盒为上海茂元科技有限公司进口分装产品；AB血清购自上海市中心血站，未注明的其 它化学试剂均为国产分析纯试剂。 I．2菌株和子实体 lucidum 供试灵芝菌种Ganoderma 2(GL2)由上海农科院食用菌研究所药用真菌研究室选 育。不同品种的灵芝栽培子实体由上海市农科院食用菌研究所育种室王南博士提供。各菌种分别 编号如下： 江西黑芝。 1．3实验方法 1．3．1 (％)。总多糖的含量由硫酸苯酚法测定，还原糖由二硝基水杨酸法测定。 1．3．2 灵芝子实体和菌丝体提取物的制各、分离与纯化：子实体和菌丝体分别用5倍蒸馏水煮沸提 取四次，每次1个小时，合并四次提取液，浓缩至小体积。缓慢地向浓缩液中加入90％的乙醇溶 液，将溶液放入4℃冰箱内，静止过夜。使用截留分子量为12，000的透析袋对粗多糖样品进行透 析，透析袋内溶液分别收集后冷冻干燥，得菌丝体