第七章酶工程制药重点.ppt

第七章酶工程制药;酶工程制药主要包括药用酶的生产好酶法制药两方面技术 药用酶：具有治疗和预防疾病功效 的酶。 酶法制药：在一定条件下利用酶的 催化作用，将底物转化为药物的技术过程。 目前常用的产酶微生物： 大肠杆菌：谷氨酸脱羧酶，用于测定谷氨酸含量或γ-氨基丁酸；天 冬氨酸酶，催化延胡索酸加氨生成L-天冬氨酸；苄青霉素酰化酶，生成新的半合成青霉素或头孢霉素；β-半乳糖苷酶，用于分解乳糖。 黑曲霉：有胞外酶和胞内酶，糖化酶、α-淀粉酶、酸性蛋白酶、葡萄糖氧化酶、脂肪酶、纤维素酶。 米曲霉：糖化酶和蛋白酶，在传统的酒曲和酱油曲中得到广泛应用。 ;木霉：纤维素酶，含有较强的17α-羟化酶，常用于甾体转化 根 霉：糖化酶、α-淀粉酶、转化酶、酸性蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶，含有较强的11α-羟化酶，常用于甾体转化。 链霉菌：葡萄糖异构酶、青霉素酰化酶、纤维素酶、碱性蛋白酶、中 性蛋白酶，含有丰富的11α-羟化酶，可用于甾体转化。 啤酒酵母：酿造啤酒、酒精、饮料酒和面包制造。可生产转化酶、丙 酮酸脱羧酶等的生产。 植物细胞：大蒜-超氧化物歧化酶、木瓜-木瓜蛋白酶、菠萝-菠萝蛋白酶。;二、提高药用酶产量的措施 1、添加诱导物：对于诱导酶的发酵生产，在发酵培养基 中添加适当的诱导物，可使产酶量显著提高。乳糖诱导β-半乳 糖苷酶，纤维二糖诱导纤维素酶。 诱导物可分为三种：酶的作用底物、酶的反应产物、酶的 底物类似物。 2、控制阻遏物浓度：有些酶的合成受到阻遏物的阻遏作 用，应设法解除阻遏作用来提高酶的产量。 3、添加表面活性剂：可分为离子型和非离子型，离子型 对细胞有毒 害作用，只能使用非离子型，可聚集在细胞膜上， 增加细胞通透性，有利于酶的分泌，可增加酶的产量。 4、添加刺激剂：在植物细胞培养生产次级代谢产物的 过程中，添加某些刺激剂可显著提高次级代谢的物的产量。 真菌的细胞壁碎片或其有效成分、微生物胞外酶以及一些小 分子物质。 5、添加产酶促进剂：植酸钙镁可是霉菌蛋白酶和橘青霉 磷酸二酯酶的产量提高1-20倍。;第三节药物的酶法生产;酶催化反应体系和反应条件的确定 1、根据底物、产物的性质和生产的要求选择催化反应体系。 2、根据酶反应动力学性质确定催化反应的条件 固定化酶： 限制或固定于特定空间位置的酶，即经物理化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。;二、反应器的选择依据 ⒈根据固定化酶的形状来选择 ⒉根据底物的物理性质来选择 ⒊根据反应的动力学特性来选择 ⒋根据外界环境对酶的稳定性 的影响来选择 ⒌根据操作要求及反应器费用 来选择;第五节 酶工程制药应用;1、蛋白酶 消化剂：用于治疗消化不良和食欲不振，使用时常常与淀粉酶、脂肪酶等一起制成复合酶制剂，以增加疗效，片剂，可口服。消炎剂：对各种炎症有很好的疗效，它能分解一些蛋白质和多肽，使炎症部位的坏死组织溶解，增加组织的通透性，抑制浮肿， 促进病灶附近组织积液的排出并抑制肉芽的形成，可口服、外敷和肌肉注射。 蛋白酶经组织注射可治疗高血压，由于蛋白酶催化运动迟缓素原及胰血管舒张素原的部分肽段水解生成运动迟缓素和胰血管舒张素，从而使血压下降。 2、α-淀粉酶：消化药。 3、脂肪酶：消化剂。假单胞菌脂肪酶能分解血液中的低密度脂蛋白和乳糜微粒，可用于预防和治疗高血脂病。 4、右旋糖苷酶：水解右旋糖苷生产小分子产物，对龋齿有显著的预防作用，可加到牙膏和淑口水中。 5、溶菌酶：抗菌、消炎、镇痛作用，作用于细胞壁，使其受到破坏，而使病原菌、腐败性细菌等溶解死亡。 ;6、超氧化物歧化酶：抗氧化、抗辐射、抗衰老、保护机体的DNA、蛋白质和细胞膜免受超氧负离子的破坏。对红斑狼疮、皮肤炎、结肠炎、白内障、风湿性关节炎、氧中毒等疾病有显著疗效，对辐射有防护作用。 7、乳糖酶：治疗乳糖缺乏症，有些人或婴儿肠道中缺乏乳糖酶，饮用含有乳糖的牛奶等食品时，由于不能分解乳糖，在肠道中，乳糖会因为细菌分解而产生有机酸，刺激肠道引起呕吐。 8、链激酶：可催化纤维蛋白酶原，激活成纤维蛋白酶，将纤维蛋白水解，使血栓溶解。 9、尿激酶：溶解血栓。;二青霉素酰化酶抗生素生产中的应用 ;青霉素酰化酶能以青霉素或头孢霉素为原料，分别在青霉素的6位或者头孢霉素的7位催化酰氨键的形成与断裂。典型的应用顺序为首先催化青霉素或头孢霉素酰氨键的断裂，获得半合成抗生素的直接底物6-氨基青霉烷酸(6-APA)或7-氨基头孢霉烷酸(7-ACA)；然后在其他酰基供体存在的条件下催化形成新的酰氨键，从而获得具有全新侧链的新型抗生素。 ;四、固定化酶在生物传感方