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精品论文 参考文献 自动化定量检测梅毒的研究进展 绍兴市妇幼保健院 浙江 312000 摘要： 梅毒是由梅毒密螺旋体感染引起的。传统检测梅毒的方法需要熟练的技术员操作和解释结果。最近的研究显示，自动化定量检测梅毒的方法正成为研究热点，将逐渐替代手工法，而自动化RPR检测特别适合于疗效监测。 关键词：梅毒；密螺旋体实验；乳胶凝集；RPR 目前，在临床实验室常用的梅毒检测方法一般需手工进行，肉眼或显微镜观察结果，容易误判，而且不能准确定量，很难量化疗效。国外已开始研究自动化检测梅毒的方法，自动化定量检测必将成为梅毒检测的发展趋势。另一方面，我国梅毒感染呈上升趋势【1-2】，甚至胎传梅毒感染也呈逐年上升趋势【3】，不仅关系到病人本身，还关系到我国出生人口素质，因此，需要尽快提高梅毒的检测手段，早期诊断，早期治疗，更好为临床服务。 下面，本文就近年来自动化定量检测梅毒的研究进展做一综述。 一、传统梅毒检测方法----梅毒抗体检测【4】 （一）、特异性抗体检测。 梅毒螺旋体的重要致病因子包括12种膜蛋白和几种溶血素，当人体感染梅毒螺旋体后，大约经过3周的潜伏期，在入侵部位出现硬下疳，然后5-15天后可在血清中检测出梅毒特异性抗体。目前常用的有梅毒密螺旋体血凝试验（TPHA），梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA），酶联免疫吸附试验（ELISA），梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS），胶体金法，梅毒抗体蛋白印记法（Western-blot，WB）。 检查特异性抗体的试验目标是在临床进行确诊，该类检测能很好诊断各期梅毒，结果稳定可靠，但价格相对较高且耗时长。其缺点是不适于大批量的筛选试验，无法对梅毒的疗效及预后进行判断，也无法确定梅毒是否已被治愈和再感染。 （二）、梅毒非特异性类脂质抗体检测。 梅毒非特异类脂质抗体为梅毒螺旋体侵犯及损伤组织所产生，出现较晚，一般在硬下疳出现4周才能检出，在梅毒早期患者经充分治疗后滴度可逐渐下降直至完全消失，当病情复发或再感染后可由阴性转阳或滴度逐渐上升。目前常用的方法有：性病研究实验室试验（VDRL），血清不需加热的反应素试验（USR），快速血浆反应素环状卡片实验（RPR）和甲苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST）。 此类试验价格便宜、手工进行，其中RPR是观察治疗效果、复发、或再感染的重要指标。但此类试验要由肉眼或显微镜观察结果，其缺点是费人费时费力，不适合有大批量标本的血站医院筛查；而且实验人为影响因素较多，容易误判；由于不能准确定量，很难量化疗效。 二、自动化检测梅毒的发展方向。 （一）、PCR（Polymerase chain reaction-based tests，聚合酶链反应试验）。 用PCR方法检测梅毒的研究是从90年代就开始了【5】，但是费时费力，一直没有在临床得到推广。2013年，Gayet-Ageron A[6]系统分析了从1990年1月至2011年1月间用PCR方法诊断梅毒的报道，发现用PCR方法特异性好，但是灵敏度只有中等，对结果的影响因素很多，包括：一、不同的标本，会有不同的检出率。其中在初发梅毒的溃疡物中，PCR法检出率最高。PCR对血液中梅毒的检测不是很理想，血清和血浆中梅毒的检出率要高于全血中的检出率；二、选择的目标基因不同，如有的实验室选择tpp47，而有的则选择 polA gene，因而检出率也不同。；三、选择的PCR方法不同，如巢式PCR（Nested PCR）、实时定量PCR检测（real-time polymerase chain reaction）、多重PCR（Multiplex PCR）等，检出率也不同。 2012年，Grange PA[7]结合临床表现，血清学检测，DEM（dark-field microscopy，暗视野显微镜），巢式PCR（扩增tpp47基因）等手段检测梅毒，发现用PCR检测拭子标本，其灵敏度达82%，特异性达95%，与DFM结果的吻合率为0.53，但是血标本的PCR结果并不好，在外周血单核细胞，血浆，血清，全血中的灵敏度分别只有29%，18%，14.7%，24%。 总体说来，用PCR方法检测溃疡物和硬下疳，还是较好的方法。 （二）、自动化免疫法检测血清抗体。 Saral Y[8]等人比较了用CMIA（Chemiluminescence Microparticle Enzyme Immunoassay，化学发光酶免疫检测），RPR及TPHA三种方法检测117位梅毒患者的结果，发现和TPHA相比，RPR与CMIA的灵敏度分别是58%vs 98%，特异性是0% vs 1