血管紧张素原基因C521T多态性与脑梗死的关系.docVIP

精品论文 参考文献 血管紧张素原基因C521T多态性与脑梗死的关系 孙洪英 和姬苓 杨国安 张利荣 宋瑞琦 张 佳 （包头医学院第一附属医院神经内科 014010） 【中图分类号】R743 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)23-0056-03 【摘要】 目的 本课题旨在研究血管紧张素原（AGT）基因C521T单核苷酸多态性与脑梗死的关系，从分子水平探讨脑梗死发病的机制及特点。 方法 采用病例-对照研究，结合聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术，检测82例脑梗死患者和89例对照者的AGT基因521位点基因型和等位基因，比较和分析病例组与对照组间该基因型及等位基因的分布频率差异。 结果 脑梗死组与对照组比较, AGT 521TT基因型频率22.0%显著高于对照组6.7%,差异有显著性（Plt;0.05）；脑梗死组中AGT 521T等位基因频率为28.0%，与对照组比较,显著高于对照组11.8%,差异有显著性（Plt;0.05）。有无高血压CI之间比较各基因型频率和各等位基因频率无显著性差异，P＞0.05。 结论 AGT 521TT基因型和T等位基因可能为脑梗死的易患因素。在本组人群中AGT C521T碱基突变不依赖是否致高血压而与脑梗死的发病相关。 【关键词】 脑梗死 血管紧张素原 基因多态性 脑梗死（CI）具有发病率高、死亡率高和致残率高的特点，其发病机制较为复杂，涉及多种危险因素，遗传因素在其中起了重要作用。近年来CI发病的基因基础已成为研究CI发病机制的新方向，尤其是肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）基因多态性与CI的关系越来越得到人们的关注。本研究采用病例-对照研究的方法，结合聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-PRLF)技术，测定AGT基因C521T单核苷酸多态性，从分子基因水平为脑梗死易感者的筛检和识别提供依据。 1 对象与方法 1.1对象（1）CI组：系2006年5月-2007年8月住院的CI患者82例, 男65例，女17例；年龄57～81岁，平均（61.04plusmn;10.31）岁；病程2～60天，平均（32plusmn;13）天；高血压32例；吸烟史34例。全部病例符合第四届全国脑血管疾病会议制定的脑血管疾病诊断标准, 均经CT/MRI证实。除外肝肾疾患。（2）正常对照组：系同期我院健康体检者89名， 男66名，女23名；年龄55～76岁，平均（60.45plusmn;9.10）岁；对照组除外脑血管意外、冠心病、糖尿病、严重肝肾功能损害。研究个体间无血缘关系。 1.2 方法 1.2.1 血脂、血糖检测：CI组患者在住院次日，正常对照组在体检日清晨空腹采肘静脉血6ml，其中4ml入无菌干燥管，送生化室用全自动分析仪检测血浆总胆固醇（TC）、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）、血糖(BG)浓度。 1.2.2 AGT基因多态性的测定：2ml血标本入EDTA-Na2抗凝管，用常规酚/氯仿抽提方法提取基因组DNA。应用PCR-RFLP技术检测AGT C521T基因多态性。AGT C521T引物参照Caulfield M 等[1]的设计，上游引物：5rsquo;-GATGCG CACAAGGTCCTG-3rsquo;;下游引物：5rsquo;-CAGGGT GCTGTCCACACTGGCTCGC-3rsquo;。 PCR反应体系及条件如下：制备好的模板DNA 1.8mu;l，加入PCR反应混合液，反应体系25mu;l (含引物各0.5mu;l，2times;Taq PCR Master Mix 12.5mu;l)，混匀后，液体石蜡封顶进行PCR反应，预变性94℃ 4 min，变性94℃ 30 s，退火58℃ 30 s ，延伸72℃ 45 s，共35个循环；最后72℃ 延伸5 min。AGT C521T基因扩增产物10 mu;l加10 U内切酶Nco I,2.5 mu;l 10times;buffer，37℃水浴4h后终止酶切反应。2%琼脂糖凝胶电泳分型。 1.2.3 统计学方法应用SPSS-13.0软件进行分析。AGT基因型分布及等位基因频率应用基因计数法得到并通过X2检验；按照Hardy-Weinberg平衡定律进行群体平衡验证。计量资料比较采用方差分析t检验；计数资料的比较采用X2检验；采用多因素Logistic回归方法分析AGT基因多态性对疾病的影响，并计算其95%可信区间（95% CI）