芝麻高纯度线粒体DNA提取技术研究-华北农学报.PDFVIP

华北农学报 ·2 0 1 1 ，2 6 (3 ):9 0 -9 4 芝麻高纯度线粒体DNA 提取技术研究 ， ， ， ， ， ， 黎冬华 王林海 张艳欣 吕海霞 张晓燕 刘 佳 张秀荣 ( ， ， 430062) 中国农业科学院油料作物研究所 农业部油料作物生物学重点开放实验室 湖北武汉 : 2 ， DNA (mtDNA ) 摘要 以 个芝麻品种黄化苗为试验材料 通过比较植物线粒体 提取过程中的关键影响因素 DNase ， 、 、 mtDNA 。 、2 400 g 15 处理时间 建立了一种经济 快速 高效的芝麻 提取方法 该方法分别通过匀浆化处理 离心 min 12 000 g 12 min ， DNase 1． 5 h DNA 结合 离心 的差速离心方法分离获得粗制线粒体 再经过 酶切处理 去除基因组 ， 0 ． 6 mol / L ， SDS- K mtDNA 。 的污染 然后经 蔗糖衬垫离心获得纯的线粒体 通过 蛋白酶 方法裂解线粒体获得芝麻 经 : 1 g 1 g mtDNA ; 1． 0% 过核酸蛋白分析仪分析表明 本技术每 芝麻黄化苗能获得 μ 以上 通过 琼脂糖凝胶电泳检测表明 mtDNA ， ; ( beta-actin 、 rrn26S 获得 完整 无明显降解 并利用三类特异引物 核基因特异引物 线粒体基因特异引物 以及叶 ARCP5) PCR mtDNA 。 mtDNA ， 绿体基因特异引物 进行 检测表明提取的 为高纯度 芝麻高纯度 提取技术的建立 为研 ( 、 ) 。 究与芝麻线粒体基因有关的性状 如细胞质雄性不育 抗逆性等 奠定了技术基础 : ;mtDNA ; ;DNase 关键词 芝麻 提取 处理 中图分类号:S565 ． 03 文献标识码:A 文章编号:1000 － 7091 (2011)03 － 0090 － 05 The Study on the Extraction Technology for Pure Mitochondrial DNA from Sesame LI Dong-hua ，WANG Lin-hai ，ZHANG Yan