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物理消毒灭菌法 一、热力灭菌法 高温对细菌具有明显的致死作用，因此最常用于消毒和灭菌。多数无芽胞细菌经55～60℃作用30～60min后死亡。湿热80℃经5～10min可杀死所有细菌繁殖体和真菌。 （一） 干热灭菌法　　 1.焚烧　彻底　　　 2.烧灼　 直接用火焰灭菌，适用于微生物学实验室的接种环、试管口等的灭菌 　　　 3.干烤　　 利用干烤箱灭菌，一般加热至160～170℃经2 h。适用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品，例如玻璃器皿、瓷器、玻质注射器等的灭菌。 　　 4.红外线　 红外线是一种0.77～1000μm波长的电磁波，尤以1～10μm波长的热效应最强。但热效应只能在照射到的表面产生，因此不能使物体均匀加热。 　 　 * 物理消毒灭菌法 （二）湿热灭菌法　　 1.巴氏消毒法（pasteurization） 用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物，而仍保持物品中所需的不耐热成分不被破坏的消毒方法。 　　 　　 2.煮沸法 在1个大气压下，水的煮沸温度为100℃，一般细菌的繁殖体5min能被杀死，细菌芽胞常需煮沸1～2h才被杀灭。 　　 3. 流动蒸气消毒法　 又称常压蒸气消毒法，是利用一个大气压下100℃的水蒸气进行消毒。细菌繁殖体经15～30min可被杀灭，但芽胞常不被全部杀灭。蒸笼　　　 4. 间歇蒸气灭菌法（fractional sterilization）　　利用反复多次的流动蒸气间歇加热以达到灭菌的目的。适用于一些不耐高热的含糖、牛奶等培养基。 　　 5.高压蒸气灭菌法　 脉动真空灭菌：采用真空泵把锅内变成真空，再导入蒸汽，使蒸汽在锅内迅速扩散和渗透到物品的深部。比高压蒸汽灭菌有显著优点：消毒时间为灭菌锅的1/3；更可靠，操作更方便；破坏物品的程度轻；灭菌后的敷料接近干燥，取出即用。 同一温度下湿热灭菌比干热灭菌效力强：①湿热中细菌菌体蛋白较易凝固；②湿热的穿透力比干热大；③湿热的蒸气有潜热存在。水由气态变为液态时放出的潜热，可迅速提高被灭菌物体的温度 * 物理消毒灭菌法 二、辐射杀菌法　　 紫外线 波长200～400nm，以265～266nm最强，但经紫外线照射的微生物具有在可见光照射下重新复性的可能 .C波紫外灯 紫外线主要作用于DNA，使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成二聚体，干扰DNA的复制与转录，导致细菌的变异或死亡。紫外线穿透力较弱，普通玻璃、纸张、尘埃、水蒸气等均能阻挡紫外线 　　 电离辐射　 包括高速电子、X射线和γ射线等。在足够剂量时，对各种细菌均有致死作用。其机制在于产生游离基，破坏DNA。适用于不耐热物品的灭菌,如手术缝线、器械、人造血管和人工瓣膜及药物的灭菌。电离辐射灭菌将是发达国家中最为常用的灭菌方法。 Co60射线 经照射后核酸可发生断裂,微生物因而失活。Co60射线引起的微生物失活通常为不可逆的。 　　微波　　波长1mm到1m左右的电磁波，消毒中常用的微波有2450MHZ与915MHZ两种可穿透玻璃、塑料薄膜与陶瓷等物质，但不能穿透金属表面。微波灭菌作用迅速、所需温度低(100℃ ) 、物品表面受热均匀。 应用：亚甲基蓝(methylene blue,MB) 联合光照(Light) 方法 补骨脂素联合紫外线(UVA ) 照射灭活微生物 * 物理消毒灭菌法 三、滤过除菌法 用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去 　　 四、超声波杀菌法　　 高于20千周/s的声波 超声波可裂解多数细菌，尤其是革兰阴性菌更为敏感，但往往有残存者。目前超声波主要用于粉碎细胞，以提取细胞组分或制备抗原等。超声波裂解细菌的机制主要是它通过水时发生的空（腔）化作用，在液体中造成压力改变，应力薄弱区形成许多小空腔，逐渐增大，最后崩破。崩破时的压力可高达1000个大气压。 五、干燥与低温抑菌法 有些细菌的繁殖体在空气中干燥时会很快死亡，例如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、霍乱弧菌等。但有些细菌的抗干燥力较强，如溶血性链球菌在尘埃中存活25d，结核分枝杆菌在干痰中数月不死。芽胞的抵抗力更强，如炭疽芽胞杆菌的芽胞耐干燥20余年。干燥法常用于保存食物，浓盐或糖渍食品可使细菌体内水分逸出，造成生理性干燥，使细菌的生命活动停止，从而防止食物变质。　　 低温可使细菌的新陈代谢减慢，故常用作保存细菌菌种。当温度回升至适宜范围时，又能恢复生长繁殖。为避免解冻时