诱导型克林霉素耐药葡萄球菌的检测.docVIP

精品论文 参考文献 诱导型克林霉素耐药葡萄球菌的检测 孟洁（江苏省大屯煤电公司中心医院检验科 江苏徐州 221611） 【摘要】 目的：了解我院葡萄球菌对红霉素,克林霉素的耐药性，以及红霉素对克林霉素诱导耐药的发生率。方法：采用K一B法检测葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性，头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌，D试验检测诱导型克林霉素耐药表型。结果：所有156株葡萄球菌中对红霉素和克林霉素耐药(cMLS)为88 株(56.4%); 对红霉素耐药对克林霉素敏感但D 试验阳性(iMLS)为 37 株(23.7%); 对红霉素耐药对克林霉素敏感但D 试验阴性(MS)为31 株(19.9%)。结论：临床微生物实验室常规进行D试验检测葡萄球菌中红霉素对克林霉素的诱导耐药性。以免出现错误的药敏结果，而误导临床医生正确选用大环内酯类、林可霉素类、链阳霉素B类（MLS）抗生素。 【关键词】葡萄球菌 红霉素 　克林霉素 　D 试验 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）05-0061-02 葡萄球菌广泛分布自然界，多存在于环境中以及人与动物的皮肤黏膜上，可致多种化脓性感染，是引起社区和医院感染的主要病原菌。大环内酯类、林可酰胺类和链阳菌素B类抗生素被广泛使用于临床治疗葡萄球菌,其中克林霉素由于其组织渗透性强、价格低和可口服等特点,所以常被作为对青霉素过敏或耐甲氧西林葡萄球菌的首选替代药物,特别是皮肤和软组织的感染。自动化仪器进行药敏试验时,cMLS型耐药的葡萄球菌和B群链球菌可以准确的测定出，而iMLS型和MS型耐药菌株则无法鉴别,为区分这两种表型CLSI推荐了一种纸片法D试验。本试验采用D试验检测临床分离的红霉素耐药葡萄球菌。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1菌株来源　收集本院2009年11月ndash;2012年07月临床分离的156株对红霉素耐药的葡萄球菌(不包括同一患者的重复分离株)。其中金黄色葡萄球菌（S.aureus）67株,凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)89株。菌种经法国生物梅里埃公司的API微生物生化鉴定板条鉴定到种,质控菌株金葡菌ATCC25923。 1.1.2培养基　血琼脂平板、MH平板购自法国生物梅里埃公司,药敏纸片红霉素(15mu;g)、克林霉素(2mu;g)、头孢西丁(30mu;g)购自浙江康泰公司。 1.2方法 1.2.1D试验　按照CLSI2007年标准[1],将0.5麦氏单位葡萄球菌的新鲜菌悬液,均匀涂布于MH平板上,在相距15mm处(边缘到边缘)贴上红霉素和克林霉素药敏纸片,35℃孵育18～24h后观察结果。在对红霉素耐药克林霉素敏感的菌株中若靠近红霉素纸片一侧的克林霉素抑菌圈变钝,形似大写字母“D”则为D试验阳性(iMLS型耐药)(见图1);若克林霉素抑菌圈正常仍为圆形,则为D试验阴性(MS型耐药)(见图2);若对红霉素和克林霉素均耐药则为cMLS型耐药。 1.2.2头抱西丁纸片扩散法药敏试验按CLSI2007年标准操作和结果判读，对于金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌:头抱西丁抑菌圈(mm)le;19为耐药，ge;20为敏感;对于其它凝固酶阴性葡萄球菌:le;24为耐药，ge;25为敏感。 2 结果 2.1本试验所有菌株的耐药及诱导耐药情况(见表1) 对红霉素耐药克林霉素敏感但D试验阳性(iMLS)37株(23.7%)(见图1);对红霉素耐药克林霉素敏感但D试验阴性(MS)31株(19.9%);红霉素和克林霉素均耐药(cMLS)88株(56.4%)。 (图1葡萄球菌D 试验阳性) (图2葡萄球菌D 试验阴性) 表1葡萄球菌的耐药性及诱导耐药检测结果 注：E-红霉素、CL-克林霉素、R-耐药、S-敏感 3 讨论 葡萄球菌对大环内酯类抗生素的耐药机制主要有两种:①抗生素作用靶位改变,即产生由erm基因编码的RNA甲基化酶,这种酶能对细菌核糖体50S亚基23SrRNA进行特定核苷酸残基甲基化,从而导致对大环内酯类、林可酰胺、链阳菌素B的耐药(MLS型耐药);②编码外排蛋白的质粒基因msr可介导细菌对14和15环大环内酯类和链阳菌素B的耐药,但对林可酰胺敏感(MS型耐药)[2]。MLS型耐药可分为诱导型(iMLS)和组成型(cMLS):iMLS型耐药是指红霉素作为诱导剂可通过衰减机制诱导e