鸡传染性喉气管炎 禽类实验室诊断技术课件.pptVIP

鸡传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定 一、材料 SPF 鸡胚； 鸡传染性喉气管炎标准阳性血清； 鸡传染性喉气管炎标准阴性血清。 二、方法 1、病料处理 取发病初期病鸡的喉头、气管各一段,剪碎、研磨,5000r/min离心20min,取上清加青链霉素各1000IU/ml，37 ℃作用 30min后 ，-20℃保存备用。 二、方法 2、鸡胚接种　 取处理的病料上清液 ，经绒毛尿囊膜 接种 10 日 龄 SPF 鸡胚 5 枚 ， 0 .2 mL /枚 ，37 ℃孵育 ，连续观察 5 d，待鸡胚死亡后立即取出（120 h 不死亡者亦取出 ）， 放 4 ℃冷却。 无菌取出绒毛尿囊膜， 检查尿囊膜 病变及胚体情况 ， 再取有典型痘斑的尿囊膜 ，经研磨、 离心等处理后 ，按上述方法传代 ，如此连续传 3~5 代。 二、方法 （3）琼扩实验 用分离毒制备的琼扩抗原分别与标准阳性血清、 标准阴性血清在1~1.5% 琼脂板上按常规方法打孔、加样 ， 置 37 ℃湿盒中 ，24 h 后观察结果。 注：抗原制备方法：收集含有大量痘斑的尿囊膜加入少量的PH7.4的PBS液（或生理盐水）中制成匀浆， 经超声波裂解后，2 000 r / m in 离心 20m in， 取上清即为抗原。 三、试验结果判定 1、鸡胚病变：鸡胚接种病料后在 120 h 内无死亡 , 将其置 4 ℃冻死。 剖检鸡胚见尿囊