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  • 2018-01-24 发布于浙江
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PCR技术原理(选学)

PCR技术原理(选学) ①模板:单链或双链DNA ②引物:16-30 bp合成的寡核苷酸 ③DNA聚合酶:耐热的DNA聚合酶 ④底物:四种脱氧三磷酸核苷 (dNTP: dATP、dTTP、dCTP、dGTP) ⑤ Mg2+: DNA聚合酶的激活剂 4.PCR反应程序 ⑴94~96℃ 30’’-3’ 预变性(使模板DNA充分变性) ⑵94℃ 30’’ 变性 ⑶50-60℃ 30’’-1’ 复性(使引物与模板充分退火) ⑷72℃ n’(按1’扩增1kb计算)延伸 ⑹72℃ 3-7’ 总的延伸(使产物延伸完整) ⑺4-10℃ 保存 * * 定义: PCR技术又称聚合酶链式反应(polymerase chain reaction),是通过模拟体内 DNA 复制的 方式,在体外选择性地将 DNA 某个特殊区域扩 增出来的技术。 半保留复制:沃森-克里克根据DNA的双螺旋模型提出的DNA复制方式。即DNA复制时亲代DNA的两条链解开,每条链作为新链的模板,从而形成两个子代D

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