新城疫病毒的分离 禽类实验室诊断技术课件.pptVIP

鸡新城疫的诊断 一、病毒的分离鉴定 二、血清抗体效价检测 一、病毒的分离鉴定 　 9~11日龄SPF 鸡胚 新城疫标准阳性血清 。 （二）方法 1. 病料的处理 采自早期病例，慢性病例不适宜于分离禽病毒，病鸡扑杀后应用无菌手术采取脾、肾、肝、肺、脑或骨髓等组织。病料剪碎研磨，加5倍生理水，5000 r /min离心20m in，取上清加青、链霉素各1000 IU/ml，37 ℃作用30min后 ，- 20℃保存备用。 （二）方法 2、鸡胚接种　 取处理的病料上清液，经尿囊腔接种于9~11日龄 SPF鸡胚至少5枚，0.2mL /枚37℃孵育至全部或大部分鸡胚发生死亡为止 ，弃去24h内死亡的鸡胚，以后每隔2h观察1次，收取死亡鸡胚置4 ℃冰箱，气室向上，6～24小时获尿囊液，并观察鸡胚病变。 （二）方法 3、效价测定 测鸡胚尿囊液的血凝效（HA ） 。 4、 血凝抑制试验　 用 4 个血凝单位的分离病毒和新城疫标准阳性血清做血凝抑制试验 （H I），测定新城疫标准阳性血清的凝集抑制价。 （三）试验结果判断 鸡胚接种病料后 ，24 ～ 30h 内 全部死亡 ，死亡鸡胚全身出血 ，头部尤为严重。 死亡鸡胚的尿囊液能凝集鸡红细胞 。此凝集作用可被新城疫标准阳性血清所抑制（凝集抑制价在1：24以上）。说明该分离病毒为新城疫病毒。 二、血清抗体效价检测