微生物检测实验教学大纲及讲义2010修改版.docVIP

《微生物检测实验》课程教学大纲 制定实验教学大纲的依据 参考其它院校相关专业的实验内容，参照国家最新标准和本课程的基本技术，结合我系专业课程的设置而制定，便于学生掌握和学习最新的检验方法。 二、本课程实验教学在培养能力中的地位和作用 《微生物检测》是国内许多高等院校为食品、制药、微生物等专业的本科生和大专生开设的专业课，同时在食品和药品生产及科研工作中应用广泛，主要通过实验使学生得到微生物学检测实验技技能的训练，使他们了解或掌握国内外先进的技术和方法，与迅速发展的学科前沿接轨，同时可以适应将来实际工作的需要。《微生物检测实验》是辅助微生物检测课程而开设的一些常规实验技术，用以培养学生的实验操作能力的重要教学环节，着重训练学生的基本操作技能。总之，通过微生物检测实验，培养了学生独立动手能力和科学观察能力，明确实验是科学研究工作之本，树立严谨的科学态度和端正的科学作风，为今后正走向社会，走上工作岗位奠定良好的基础。 实验目的与应达到的实验能力标准： 本课程安排了以下几个实验：（1）口服活菌制剂的微生物检测；（2）MPN法测定大肠菌群；（3）ELISA定量测定食品中的AFB1。 通过上述实验可达到如下实验目的和标准： 1. 掌握食品检样的采集和处理； 2. 掌握测定菌落总数和大肠菌群的国标法； 掌握ELISA测定微生物毒素的原理和步骤。 三、教学文件及教学形式： 教学文件：《微生物学实验》（第三版）沈萍、范秀容主编 高等教育出版社 教学形式：预习、讲授、演示、学生动手实践 四、本实验所需要的主要仪器设备、及耗材、药品 序号 实验项目 仪器设备 耗材 药品 菌种 1 口服活菌制剂的微生物检测 电子天平、超净工作台、灭菌锅、烘箱、培养箱、试管架、电炉子 记号笔、吸管、试管、接种针、酒精灯、脱脂棉、石棉网、精密试纸 牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢铵、磷酸氢二钾、氯化钠、琼脂、乙醇、葡萄糖、硫代硫酸钠、氢氧化钠、浓盐酸、乙醇、酵母膏、酚红、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、可溶性淀粉、胰胨、 大肠杆菌、乳酸菌、酵母菌 2 MPN法测定大肠菌群 电子天平、超净工作台、灭菌锅、烘箱、显微镜、培养箱、试管架、电炉子、pH计 记号笔、三角瓶、带塞玻璃瓶、培养皿、移液管、吸管、试管、德汉氏小管、载玻片、盖玻片、酒精灯、脱脂棉 溴钾酚紫、乳糖、蛋白胨、EMB培养基（伊红、美蓝）、磷酸氢二钾、无水亚硫酸钠、碱性复红、乙醇、结晶紫、草酸铵、碘片、碘化钾、番红 大肠杆菌 3 ELISA测定AFB1 酶标仪、移液枪（20、100、200、1000微升）、培养箱、冰箱，天平，灭菌锅。 记号笔、滴管、脱脂棉、48孔聚苯乙烯酶标板、25mL容量瓶或具塞试管、分液漏斗、移液管、烧杯、量筒、具塞锥形瓶、蒸发皿 面粉、啤酒、水解酪蛋白、酵母膏、多粘菌素、硫酸镁、氯化铁、氯化钴、酶标诊断试剂盒（江苏省微生物研究所有限责任公司） 五、实验成绩评定： 侧重平时实验要求，占总成绩30%，平时实验报告占70% 六、实验教学项目表 适用专业及编号 生物工程、生物技术 总学时/实验学时 48/18 序号 实验项目 内容提要 学时 实验 要求 实验 类型 实验 组数 每组 人数 1 口服活菌制剂的微生物检测 接种、培养基配制、培养、观察菌落特征,菌落计数 8 必做 操作 分析 15组/轮 2 2 MPN法测定大肠菌群 初发酵、平板分离、染色镜检、复发酵 5 必做 操作 分析 15组/轮 2 3 ELISA测定AFB1 ELISA原理及操作 5 必做 操作 分析 15组/轮 2 《微生物检测实验》讲义 实验一、口服活菌制剂的微生物检测 一、实验目的 掌握乳酸菌饮料的卫生学的微生物检测方法，通过检测菌落总数、酵母菌数、霉菌数，了解产品的卫生质量，通过对乳酸菌的数量的检测，了解该产品的质量。 二、实验原理 1．菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。　　菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。但在某些情况下，霉菌和酵母也可造成产品的腐败变质。由于它们生长缓慢和竞争能力不强，故常常在不适