丁醇合成途径关键酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达.pdfVIP

Research Paper 研究报告 微生物学报 A cta M icrobiolog ica Sinica 52 (5 ):588 － 593 ;4 May 20 12 ISSN 000 1 － 6209 ;CN 11 － 1995 / Q http :/ / journals． im ． ac ． cn / actamicrocn 丁醇合成途径关键酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达 2 2 2 1 ，2 * 1 ， ， ， ， 张艳 周鹏鹏 王丕祥 谢静莉 叶勤 1 2 ， ， ， 200237 华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室 生物工程学院食品科学与工程系 上海 :【 】 (Clostridium acetobutylicum )ATCC824 ， 摘要 目的 克隆丙酮丁醇梭状芽胞杆菌 丁醇合成途径关键酶基因 构 。【 】 C． acetobutylicum ATCC824 ， 建产丁醇的工程大肠杆菌 方法 以 基因组为模板 分别扩增丁醇合成途径关 thil ，adhE2 B CS op eron (crt-bcd -etf B -etf A -hbd ) ， B CS op eron-adhE2 -thil / pTrc99 a / 键酶基因 和 基因序列 构建 MG1655 (pBAT )。 E ． coli pBAT 0. 1 mmol - - (IPTG) 5 h ， 重组菌 采用 异丙基 β 硫代半乳糖苷 诱导 测定乙酰基 (THL )、3 - A (HBD )、3 - A (CRT )、 A 转移酶 羟基丁酰辅酶 脱氢酶 羟基丁酰辅酶 脱水酶 丁酰辅酶 脱氢酶 (BCD)、 (BYDH / BDH) 。 ， 、 醛醇脱氢酶 的酶活 并以该基因工程菌作为发酵菌种 采用好氧 厌氧和微好氧三种 ， 。【 】 :THL 0. 160 U / mg protein ， 培养方式 检测丁醇产量 结果 酶活测定结果显示 酶活达到 酶活力提高了近 30 ;HBD 5 ;CRT 1. 53 U / mg protein ， ;BCD 倍 酶活力提高了近 倍 酶活达到 野生菌株无此酶活 酶活力提高了 32 ;BYDH / BDH 。3