动物源耐药性监测采样、检测技术要点.docVIP

动物源耐药性监测的采样、检测技术要点 一、采样安排 （一）采样地点选择 中国兽医药品监察所选取河北、江西、湖北、广西、北京、云南等6个省市的10-20个养殖场；中国动物卫生与流行病学中心选取山东、内蒙、湖南等3个省市的10-15个养殖场；辽宁、上海、成都和广东、河南等5省（市）耐药性监测实验室在本省（市）（或周围地区）选择养殖场6-15个。每个实验室应选择6个养殖场（鸡场和猪场各半），定点、定季度采集大肠杆菌和肠球菌，进行耐药性跟踪监测。 （二）采样类型 利用棉拭子采泄殖腔、盲肠（禽）和肛门（猪）作大肠杆菌、肠球菌和空肠弯曲杆菌分离；主要从成鸡盲肠采样，也可从孵化后期死亡鸡胚采样分离沙门氏菌；选择奶牛场1~2个，采取新鲜牛奶分离金黄色葡萄球菌。根据养殖场规模，每个场采样30~50份。 （三）监测的细菌种类 包括大肠杆菌、肠球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、空肠弯曲杆菌、猪多杀巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌。沙门氏菌和金黄色葡萄球菌可根据各地分离情况进行监测。 二、认真做好调查和记录 各承担任务单位要认真做好饲料和饲料药物添加剂来源与种类调查、采样前动物使用抗菌药物情况调查（预防用药和治疗用药）和采集样品的统计，据实填写采样记录表。 三、细菌的分离鉴定 采用特殊培养基，定向做大肠杆菌、肠球菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和弯曲杆菌分离，用生化试验、PCR技术或血清学方法对分离物进行鉴定。本年度各实验室分离细菌的种类和数量见附件1。将分离到的菌株在-20℃以下加甘油保护剂冷冻保存或用其它合适方法保存。 四、耐药性测定 用中国兽医药品监察所提供的药敏板进行耐药性检测。将测定结果正确填入耐药性检测结果统计表（见附件5）。检测用质控菌株由中国兽医药品监察所统一供应。 五、结果报送 各实验室的采样情况和耐药性检测结果，应填入《采样记录表》和《耐药性检测结果统计表》统一报送中国兽医药品监察所，经统计分析后上报农业部兽医局。 结果的上报分电子版和纸质2部分，电子版直接登录动“物源细菌耐药性数据库”上报。纸质结果的上报要求统一格式、统一内容。主要内容分6部分阐述：（1）本年度任务简述；（2）细菌分离情况；（3）耐药性监测情况；（4）耐药性监测结果分析；（5）存在问题；（6）改进措施和建议。 附录3 采样记录表 采 样 地：___________ _____ 养 殖 场：_________ ____ ___ 采样时间：__________ ____ 联系人姓名、电话：________________ __ 样品来源 □ 猪 日龄 ____ □ 鸡 日龄 ____ □ 牛 日龄 ____ 其他________日龄 ____ □ 消化道 □ 呼吸道 □ 泌尿生殖道 □ 肝胆 □ 脑 □ 淋巴结 □ 关节 □ 奶样 □ 皮肤 □ 粪便 其他______________ 采样动物健康状况 养殖量 □ 健康 □ 发病及症状：____________________________ ________ 。 采样养殖场使用抗菌药情况 饲料来源、添加抗菌药种类 治疗用抗菌药种类与使用方式 生产厂名称 饲料添加的药物名称 剂量 使用时间 药物名称 使用方式 剂量 单个动物剂量 饮水添加剂量 饲料添加剂量 用药天数 样品分离菌株 □ 大肠杆菌 □ 金黄色葡萄球菌 □ 肠球菌 □ 沙门氏菌 □ 空肠弯曲杆菌 其他__________________ 菌株编号： 注：菌株编号按照“菌种、来源-采样地、采样年月-菌株编号”的格式进行。如EB-L0701-0001，其中：E（大肠杆菌）B（牛）L（鲁）07（年）01（月）-0001（菌株编号）。 菌种简写建议为：EC（大肠杆菌）、S（沙门氏菌）、SA（金黄色葡萄球菌）、ECi（肠球菌）、CJ（空肠弯曲杆菌）、CC（结肠弯曲杆菌） 动物简写建议为：B（牛）、P（猪）、C（鸡） 注：a为喂奶猪或保温鸡，b为保育猪或生长鸡，c为育成猪或鸡，d为种母猪或产蛋鸡。 附录4 动物源细菌分离和鉴定方法 一、动物源大肠杆菌的分离与鉴定 1范围 本方法规定了用于动物源大肠杆菌分离与鉴定的方法。 本方法适用于各种动物中大肠杆菌的分离与鉴定。 2 设备和材料 除微生物实验室常规灭