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第十八章高效液相色谱法教学教程.ppt 48页

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一、HPLC与经典LC区别;4.HPLC:分析时间大大缩短; 经典LC: 分析周期长 ;5.HPLC:可以在线检测: 经典LC:无法在线检测; HPLC:流动相为液体 ;第一节 高效液相色谱法的主要类型和原理 ;一、液固吸附色谱(LSC);3.流动相: 烷烃(底剂)+ 有机极性调节剂 ; 弱极性组分先出柱,强极性组分后出柱;正相色谱法— 固定液极性 > 流动相极性 极性小的组分先出柱 反相色谱法—固定液极性<流动相极性 极性大的组分先出柱;二、化学键合相色谱法 ;4.分离机制(多种模型) 疏溶剂理论(solvophobic theory);溶质的保留主要是溶质分子与极性溶剂分子间的排斥力,促使溶质分子与键合相的烃基发生疏水缔合。 不是溶质分子与键合相间的色散力,;5.保留行为的主要影响因素 (1)、溶质的分子结构(极性) 极性越弱,疏水性越强,k越大,tR也越大。 同系物碳数越多,极性越弱,k越大; 引入极性取代基,降低疏水性,k值变小。 (2)、固定相 键合烷基的疏水性随碳链的延长而增加,溶质的k也增大。 硅胶表面键合烷基的浓度越大,则溶质的k越大。 ;(3)、流动相 极性越强,洗脱能力越弱,使溶质的k越大 1)溶剂比例:水的比例增加,使k增大 2)pH:影响弱酸、弱碱的离解 流动相的pH降低,弱酸k增大,tR增大;弱碱k变小。;离子抑制色谱法(ion suppression chromatography;ISC ) 用少量弱酸、弱碱或缓冲溶液,调节流动相的pH,抑制有机弱酸、弱碱的离解,增加疏水缔合作用,使k变大。 适用于3≤pKa≤7的弱酸、7≤pKa≤8的弱碱;对于弱酸: 流动相pH降低,K增大,tR增大 对于弱碱: 流动相pH增大,K增大,tR增大 注:键合相允许使用的pH为2~8;1.固定相: ODS柱;3.离子对模型 ;4.影响组分保留行为的因素;第二节 高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择;1.非极性键合相 :;2.弱极性键合相: 醚基和二羟基等键合相 用于反相或正相色谱 3.极性键合相: 常用氨基﹑氰基键合硅胶(氨基柱、氰基柱) 一般用于正相色谱 ;(1)使用过程中不流失; (2)化学稳定性好; (3)适于梯度洗脱; (3)载样量大 ;二、化学键合相色谱法的流动相 (自学);三、分离条件的选择 ;固定相传质阻抗CS可以忽略 ,因df极小 流动相传质阻抗Cm ;原因:化学键合相,液体流动相 结果:HPLC的实验条件应该是:①小粒度、均匀的球形化学键合相;②低粘度流动相,流速不宜过快;③柱温适当。 ;(二)影响分离的因素 n由色谱柱(固定相)性能决定, α主要受溶剂种类的影响, k受溶剂配比的影响。 ;(三)HPLC法分离条件的选择;3. 柱温的选择: 选室温25℃左右 4.洗脱方式 : 等度洗脱、梯度洗脱;第三节 高效液相色谱仪;一、输液系统;(二)输液泵应具备的性能: 1.流量精度高且稳定 2.流量范围宽 3.能在高压下连续工作 3.液缸容积小 4.密封性能好,耐腐蚀 ;(三)输液泵操作注意事项: 1.防止固体微粒进入泵体 2.流动相不应含有腐蚀性物质 3.防止溶剂瓶内的流动相被用完 4.不超过规定的最高压力 5.流动相一般应该先脱气 ;二、分离和进样系统 ;(二)色谱柱(column) ;三、检测系统;(二)紫外检测器(ultraviolet detector) ;3.局限: 只能检测有紫外吸收的物质,流动相的截止波长应小于检测波长。 4.专属型、浓度型检测器;5.紫外检测器分类;(3)光电二极管阵列检测器 (photodiode array detector; PDAD): 一系列光电二极管,一个二极管对应接受光谱上约1nm谱带宽的单色光 ;紫外检测器;第四节 高效液相色谱分析方法 ;注:1) HPLC法中校正因子难从手册中查到,需自行测定。 待测组分纯品+内标物——混合进样 fg=(Asmi) / (Aims ) 2) 内加法 试样 -------------- 准确进样 试样(含待测)+待测组分对照品-- 准确进样;本章重点:

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