免疫学基础与应用PPT.pptVIP

免疫学基础及常用免疫检验技术;1;免疫学基础;免疫学概念;抗原(antigen,Ag) 能诱导机体免疫系统发生免疫应答，并能与免疫应答中产生的抗体或效应细胞在体内外发生特异性反应的物质均称为抗原 抗体(antibody,Ab) 在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。 ;免疫系统 人体内存在一个负责免疫功能的完整的解剖体系即免疫系统，与神经和内分泌等其他系统一样，这个系统有着自身的运行机制并可以与其他系统相互配合，相互制约，共同维持机体在生命过程中总的生理平衡。;免疫应答 指机体免疫系统接受抗原刺激发生一系列反应，并以排出或分解该抗原为目的的反应过程。 免疫应答的过程 1、识别阶段 2、活化阶段 3、效应阶段 ;免疫系统的功能;机体免疫功能;免疫检验 ;免疫检测结果为临床确定诊断、分析病情、调整治疗方案和判断预后等提供了有效的实验依据。;临床免疫学;颗粒性抗原的获得 1.细胞抗原（红细胞） 2.细菌抗原（菌体抗原、鞭毛抗原） 3.寄生虫体抗原;可溶性抗原的获取 1.体液、分泌液（血清、血浆、尿液、精液、乳汁、唾液等） 2.组织细胞培养物等 利用机械破碎法（捣碎、研磨法）、反复冻融、超声法、酶法、表面活性剂 3.分子生物学技术制备抗原 分子克隆表达蛋白质;抗体的制备（一）;抗体的制备（二）;免疫检验技术;免疫检测技术的类型;酶免疫技术;主要试剂: 酶标记的抗体或抗原 酶标物特点： 免疫学活性 酶对底物的催化活性;特点： 灵敏度高、特异性强、准确性好 酶标记试剂能够较长时间保持稳定 操作简便、对环境没有污染。 易与其它技术偶联 衍生出适用范围更广的新方法。;酶免疫技术-分类;酶免疫技术-酶联免疫吸附试验; ELISA;抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性； 抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性； 酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。;基本原理;在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物） ③酶作用的底物（显色剂） ; 测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，; 其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。 其方法简单，方便讯速，特异性强。 ;ELISA的分类 ;（一）双抗体夹心法;获得待分析物的未标定抗体;　　 间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。;包被固相载体: 用已知抗原包被 固相载体 ;（三）竞争法 ;用已知特异性 抗体包被 固相载体 ;酶免疫反应中的常用酶;酶免疫反应中常用底物; ELISA广泛用于传染病的诊断，病毒如病毒性肝炎(甲肝抗体、“乙肝三对”、丙肝抗体、丁肝抗体、戊肝抗体)、风疹病毒、疱疹病毒、轮状病毒等；细菌如结核杆菌、幽门螺杆菌等。 也用于一些蛋白质检测，如各种免疫球蛋白、补体、肿瘤标志物(甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特异性抗原等)。;酶免疫技术的应用;生物素-亲合素放大技术在酶免测定的应用;荧光免疫技术; 1. 荧光免疫测定技术的概念： 将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记，试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光素，这种免疫技术，称为免疫荧光素技术。 ; 2. 分类： ⑴荧光抗体技术(荧光显微镜技术) 抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判 定结果的检测方法。 ⑵ 免疫荧光测定技术： 抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定 荧光强度而推算被测物浓度的检测方法 ;3 .荧光的产生： 物质吸收外界能量而进入激发状态，在